ESPECTROFOTOMETRIA

Química Biológica I TP 1: ESPECTROFOTOMETRIA
OBJETIVOS:
- Reforzar el aprendizaje del uso del espectrofotómetro.
- Realizar espectro de absorción de sustancias puras: soluciones de dicromato de potasio.
- Realizar una curva de absorbancia vs concentración.
- Determinar la concentración de una muestra problema de dicromato de potasio.
FUNDAMENTO:
La espectrofotometría comprende una serie detécnicas analíticas usadas para análisis cuali y
cuantitativo.
Una radiación electromagnética se puede describir como un flujo de partículas llamadas
fotones, o bien como una onda propagándose en el espacio. De esta última descripción se
toma el concepto de longitud de onda, definiéndolo como la distancia entre dos máximos
consecutivos de la onda.
Esta es inversamente proporcional a la energía de lamisma, de tal manera que el espectro de
radiaciones electromagnéticas abarca un amplio rango de energías, las de menor energía son
las ondas de radio y las de mayor energía son las llamadas radiación gamma.

Las moléculas tienen un estado energético que se puede alterar por la absorción de radiación
electromagnética a determinada longitud de onda, lo que se puede medir para realizar un
estudio cuali ocuantitativo.
Las principales ventajas de la espectrofotometría son:
• Sensibilidad relativa elevada.
• Facilidad para realizar mediciones rápidas.
• Grado de especificidad relativamente elevado.

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Para obtener la máxima sensibilidad en una determinación debe conocerse la longitud de onda
de mayor absorción de la sustancia analizada, que no deberá coincidir con una alta absorción
de otrassustancias presentes en la reacción.
Cuando una radiación electromagnética de intensidad I atraviesa un medio homogéneo, parte
de la radiación es absorbida por la muestra y otra parte es transmitida con una intensidad i, de
tal manera que se define transmitancia de una muestra como la relación entre la radiación
transmitida i versus la intensidad luminosa incidente I, multiplicado x 100:
% T = i x100
I
La absorbancia es una medida de la cantidad de Energía luminosa incidente absorbida por una
sustancia en solución. Está relacionada con Transmitancia por medio de :

A = - Log T

A = log ( 100 / %T)

La Ley de Lambert y Beer expresa que la absorbancia de una solución es directamente
proporcional al camino recorrido por la radiación electromagnética y a la concentración de la
solución.
A = abcA: absorbancia
a: absortividad específica de cada soluto
b: distancia recorrida por el haz de luz en cm
c: concentración de la solución
La absortividad es la constante de proporcionalidad que nos permite igualar la ecuación, sus
unidades dependerán de b y c, ya que la absorbancia no tiene unidades; si b está en
centímetros y c en moles por litro, la absortividad estará en litros / mol centímetro yse
denomina coeficiente de absorción molar (E).
Requerimientos para poder aplicar la Ley:
- La medición del % de T es realizada con luz monocromática
- La medición del % de T es realizada a una región de absorción del componente a estudiar.
- La referencia es elegida de tal manera que C=0 cuando T= 100% o A= 0%
- La naturaleza de la solución debe ser tal que su transmisión responda a variacionesde C.
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Espectrofotómetro

Los aparatos de medida de la absorción de la radiación electromagnética se denominan
espectrofotómetros y pueden representarse de forma sencilla mediante el siguiente esquema:

La luz procedente de la fuente se hace pasar a través del monocromador, que la desdobla en
haces monocromáticos. El colimador tiene una rendija de ajuste variable, y según su abertura
se obtieneluz de una determinada longitud de onda.La longitud de onda que se desee utilizar
se selecciona variando la posición del monocromador. La luz que sale del colimador se hace
pasar por la solución y luego incide sobre el fototubo, donde se detecta. La señal se envía a un
registrador, el cual puede ser la escala de un galvanómetro calibrado.

Calibración del espectrofotómetro
Prender el equipo...