espectrofotometro


ESPECTROFOTOMETRO
OBJETIVO:
Controlar y asegurar el buen funcionamiento de un espectrofotómetro.
FUNDAMENTO:
Control de cubetas: Asegura que la variación de las cualidades ópticas de dos cubetas no difieran en más de un 1%.
Control de luz espúrea: Determina la presencia de luz que llega al detector sin haber atravesado la solución cuya absorbancia queremos medir. Para que la lectura seaválida el porcentaje de luz espírea debe ser menor al 1%.
Control de volumen mínimo: Asegura que toda la luz pase por la solución.
Control de centro de banda: Indica la correlación entre la longitud de onda leída en el selector y la real. Asegura la lectura de la correcta longitud de onda donde se encuentra el maximo de absorción del cromógeno, evitando la pérdida de sensibilidad.
Control delinealidad fotométrica: Indica si el espectrofotómetro responde linealmente a la ley de Lambert-Beer.
MATERIALES:
Espectrofotómetro Jenway 6300 Nº12
Espectrofotómetro Bauschg Lomb Nº1
Tubos de vidrio
Tubo Negro
Cubetas plásticas
Cubeta pintada de negro
Solución de Rojo Congo 300 mg/ l, diluída 1/5 con agua
Pipetas de 1 y 10 ml
 
 
 
 
 
 
ESPECTROFOTÓMETRO JENWAY 63001- CONTROL DE CUBAS Y CUBETAS
MÉTODO:
Primero, tomar una cubeta como referencia y medir la transmitancia de la solución preparada con colorante Rojo Congo. Realizar el mismo procedimiento con la cubeta restante. No debe existir más de 1% de variación entre los valores obtenidos; en caso contrario, corregir como error sistemático.
RESULTADOS:
T% cubeta de referencia: 4,7%
T% cubeta restante:4,5%
Variación: 0,2%
 
2- CONTROL DE LUZ ESPÚREA
MÉTODO:
Comenzar colocando la cubeta pintada de negro y medir la transmitancia en cualquier longitud de onda del espectro visible. Si el T% de luz espúrea es mayor del 1%, recurrir al service.
RESULTADOS:
T% cubeta pintada de negro: 0,0%
3- CONTROL DE VOLUMEN MÍNIMO DE LECTURA
MÉTODO:
Cargar la cubeta con 0,5 ml de la solución de colorantede Rojo Congo y leer contra blanco de agua la Abs de la misma. Luego, aumentar el volumen agregando solución coloreada (0,8; 1; 2; 2,5; 3; 3,5 ml). Informar el volumen mínimo como aquel en el que la lectura se estabiliza y no varía con el agregado de más líquido. Realizar un gráfico de Abs= f(vol agregado).
RESULTADOS:
Tabla: Absorbancia en función del volumen dado:
Vol (ml)
Abs (±0,001)
0,00,000
0,5
0,040
0,8
0,041
1,0
0,088
2,0
1,231
2,5
1,234
3,0
1,234
3,5
1,233

4- CONTROL DE CENTRO DE BANDA
MÉTODO:
En primer lugar, realizar un barrido espectral desde 450 hasta 600 nm, con intervalos de 10 nm, excepto en la franja de 490 - 530 nm donde las lecturas se tomarán cada 5 nm; utilizando la solución de colorante de Rojo Congo.
Determinar el centro de banda,graficando Abs= f(λ) y determinar el λ máximo (λ óptimo de 503 nm) .
RESULTADOS:
Tabla: Absorbancia en función de longitud de onda:
λ (nm)
Abs (±0.001)
λ (nm)
Abs (±0.001)
450
0,678
520
1,081
460
0,949
525
1,018
470
1,068
530
0,939
480
1,176
540
0,595
490
1,253
550
0,573
495
1,251
560
0,441
500
1,231
570
0,321
505
1,204
580
0,214
510
1,162
590
0,116
515
1,140600
0,065

5- CONTROL DE LINEALIDAD FOTOMÉTRICA
MÉTODO:
La solución de Rojo Congo diluída 1/5 será tomada como la solución madre al 100% (0,060 mg/ml) A partir de ésta hacer diluciones para obtener soluciones al 75; 50; 25 y 12,5% (0,045; 0,03; 0,015 y 0,0075 mg/ml respectivamente). Medir las absorbancias de las soluciones al λ óptimo. Finalmente, graficar Abs = f(Cc), considerando como dato el0%.
RESULTADOS:
(Se preparó poca cantidad de solución al 100%, por lo tanto para preparar las soluciones al 75; 50; 25 y 12,5%, se midieron 1,5; 1; 0,5 y 0,25 ml de la solución concentrada de Rojo Congo, diluyendo todas a 10 ml con agua)
Cc (mg/ml)
Abs (± 0.001)
0,0000
0,000
0,0075
0,163
0,0150
0,319
0,0300
0,673
0,0450
0,954
0,0600
1,315

 
ESPECTROFOTÓMETRO Baughs Lomb...