Espectrofotometría: Espectros de absorción y cuantificación espectrofotométrica de biomoléculas
Páginas: 12 (2818 palabras)
Publicado: 29 de septiembre de 2015
Espectrofotometría: Espectros de absorción y cuantificación espectrofotométrica de biomoléculas
Lina Vanessa Beltran Franco, Susana Marcela Calderon Heredia.
201411004, 201412888
Universidad De La Sabana
RESUMEN
El identificar un compuesto mediante su espectro de absorción, se hace por comparación y superposición con el espectro correspondiente de un compuesto conocido. Se debe considerarla existencia de máximos y mínimos y la relación de sus alturas, en segundo lugar la longitud de onda de los máximos. 1En este trabajo, se presenta el espectro de absorción de la clorofila comparando la curva de calibrado de valores patrones y sacando de esa misma gráfica la concentración de clorofila, hallada en unas hojas de lechuga mediante la linealización de la recta.
INTRODUCCIÓN
Lasbiomoléculas interactúan entre sí y se asocian para formar máquinas moleculares que cumplen variadas y fundamentales funciones en los seres vivos. Las estructuras y funciones de las biomoléculas están siendo determinadas gracias al empleo de recientes avances tecnológicos de la biología estructural y molecular. Sin embargo, tanto la estructura de las biomoléculas como las interacciones entre ellascambian dinámicamente, lo cual hace muy importante poder avanzar en el estudio de las propiedades dinámicas de las biomoléculas. El reciente desarrollo de técnicas de detección y análisis de moléculas individuales está permitiendo el acceso a ese tipo de información que, hasta hace poco, permanecía oculta.2
El uso de la espectroscopia ultravioleta-visible permite determinar de manera cuantitativalos compuestos orgánicos muy conjugados. Se produce el efecto de la espectroscopia por la capacidad de los compuestos para absorber la luz en forma de energía, a las cuales se les denomina radiación, la cual puede encontrarse dentro del rango del espectro uv-visible. La absorción de luz como energía, genera dentro de la molécula, un cambio en el estado energético basal a uno con mayor energía quese le denomina estado excitado.3 La forma en que cada molécula se distingue, es debido a los estados excitados que posee cada molécula, asimismo el espectro de absorción se presenta de distintas longitudes en cada molécula, lo cual lo hace una condición particular de cada compuesto.
Igualmente, la clorofila tiene como función absorber energía lumínica, la absorción depende en gran medida de laconcentración de clorofila y de otros pigmentos que se hallen presentes en la zona. También depende de la cantidad de luz disponible y de la cantidad de la misma, esto es, que contenga suficiente radiación comprendida en la banda de absorción.4
En este documento se presenta la capacidad de absorción de la clorofila mediante el espectro UV-vis , mediante lecturas en el espectrómetro que nos permitenrealizar una recta de calibrado bajo la ley de Lambert-beer y así mismo hallar el valor del coeficiente de extinción molar.
PALABRAS CLAVE
Absorbancia, clorofila, espectrofotometría, concentración.
MATERIALES Y MÉTODOS
Como estrategia, a continuación se describe el método que se utilizó para poder determinar la absorbancia de la clorofila a diferentes concentraciones, por medio de la lecturaen el espectrofotómetro para así poder realizar la recta de calibración de la clorofila y poder comparar sus resultados con la curva patrón.
Espectros de absorción UV-Vis para clorofila para determinar su λmax
1. Tomar el patrón de clorofila (pastilla) y macerarlo con la ayuda del mortero finamente
2. Preparar una solución patrón de clorofila de 5 mg/mL en una mezcla de etanol 90%, éterde etílico 10%.
3. Si no se disuelve completamente el sólido llevar a cabo una filtración.
4. Con el patrón montar una alícuota en una celda de cuarzo
5. Llevar a cabo un barrido del espectro UV-Vis con la ayuda del espectrofotómetro
6. En caso de no obtener pico(s) definido(s) diluir la muestra con la mezcla de etanol-éter hasta determinar la λmax
7. Una vez determinada la λmax...
Lina Vanessa Beltran Franco, Susana Marcela Calderon Heredia.
201411004, 201412888
Universidad De La Sabana
RESUMEN
El identificar un compuesto mediante su espectro de absorción, se hace por comparación y superposición con el espectro correspondiente de un compuesto conocido. Se debe considerarla existencia de máximos y mínimos y la relación de sus alturas, en segundo lugar la longitud de onda de los máximos. 1En este trabajo, se presenta el espectro de absorción de la clorofila comparando la curva de calibrado de valores patrones y sacando de esa misma gráfica la concentración de clorofila, hallada en unas hojas de lechuga mediante la linealización de la recta.
INTRODUCCIÓN
Lasbiomoléculas interactúan entre sí y se asocian para formar máquinas moleculares que cumplen variadas y fundamentales funciones en los seres vivos. Las estructuras y funciones de las biomoléculas están siendo determinadas gracias al empleo de recientes avances tecnológicos de la biología estructural y molecular. Sin embargo, tanto la estructura de las biomoléculas como las interacciones entre ellascambian dinámicamente, lo cual hace muy importante poder avanzar en el estudio de las propiedades dinámicas de las biomoléculas. El reciente desarrollo de técnicas de detección y análisis de moléculas individuales está permitiendo el acceso a ese tipo de información que, hasta hace poco, permanecía oculta.2
El uso de la espectroscopia ultravioleta-visible permite determinar de manera cuantitativalos compuestos orgánicos muy conjugados. Se produce el efecto de la espectroscopia por la capacidad de los compuestos para absorber la luz en forma de energía, a las cuales se les denomina radiación, la cual puede encontrarse dentro del rango del espectro uv-visible. La absorción de luz como energía, genera dentro de la molécula, un cambio en el estado energético basal a uno con mayor energía quese le denomina estado excitado.3 La forma en que cada molécula se distingue, es debido a los estados excitados que posee cada molécula, asimismo el espectro de absorción se presenta de distintas longitudes en cada molécula, lo cual lo hace una condición particular de cada compuesto.
Igualmente, la clorofila tiene como función absorber energía lumínica, la absorción depende en gran medida de laconcentración de clorofila y de otros pigmentos que se hallen presentes en la zona. También depende de la cantidad de luz disponible y de la cantidad de la misma, esto es, que contenga suficiente radiación comprendida en la banda de absorción.4
En este documento se presenta la capacidad de absorción de la clorofila mediante el espectro UV-vis , mediante lecturas en el espectrómetro que nos permitenrealizar una recta de calibrado bajo la ley de Lambert-beer y así mismo hallar el valor del coeficiente de extinción molar.
PALABRAS CLAVE
Absorbancia, clorofila, espectrofotometría, concentración.
MATERIALES Y MÉTODOS
Como estrategia, a continuación se describe el método que se utilizó para poder determinar la absorbancia de la clorofila a diferentes concentraciones, por medio de la lecturaen el espectrofotómetro para así poder realizar la recta de calibración de la clorofila y poder comparar sus resultados con la curva patrón.
Espectros de absorción UV-Vis para clorofila para determinar su λmax
1. Tomar el patrón de clorofila (pastilla) y macerarlo con la ayuda del mortero finamente
2. Preparar una solución patrón de clorofila de 5 mg/mL en una mezcla de etanol 90%, éterde etílico 10%.
3. Si no se disuelve completamente el sólido llevar a cabo una filtración.
4. Con el patrón montar una alícuota en una celda de cuarzo
5. Llevar a cabo un barrido del espectro UV-Vis con la ayuda del espectrofotómetro
6. En caso de no obtener pico(s) definido(s) diluir la muestra con la mezcla de etanol-éter hasta determinar la λmax
7. Una vez determinada la λmax...
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