espectrofotometría

Práctica 1. Espectrofotometría.



La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigacionesquímicas y bioquímicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una quecontiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

Material utilizado en la práctica
ESPECTROFOTÓMETRO
TUBOS DE ENSAYO (5 en total)
GRADILLA
PIPETAS (1 ml; 0,5 ml; 0,2 ml; 0,1 ml)
CUBETAS
TUBOEPPENDORF (con la solución de Riboflavina)

Desarrollo de la primera parte de la práctica
a) Proporcionalidad entre absorbancia y concentración.
1.- A partir de una disolución de riboflavina deuna concentración 0,25 mM , prepara 5 disoluciones de concentración 5, 10, 20, 30 y 40 µM. El volumen preparar de cada una de ellas será de 5 ml.
- Lo primero sería pasar las unidades de ladisolución inicial de riboflavina a su unidad correspondiente (µM):
= 0,25 Mm = 250 µM
Calculamos el volumen de riboflavina en cada una de las 5 disoluciones con sus correspondientes concentraciones:
· =·
5 µM · 250 = 5 · 5 = 0,1 ml de riboflavina
10 µM · 250 = 5 · 10 = 0,2 ml de riboflavina
20 µM · 250 = 5 · 20 = 0,4 ml de riboflavina
30 µM · 250 = 5 · 30= 0,6 ml de riboflavina
40 µM · 250 = 5 · 40 = 0,8 ml de riboflavina
Una vez calculado el volumen de riboflavina, cogemos cada uno de los tubos de ensayo y preparamos lasdisoluciones cada una a su concentración correspondiente. La rivoflavina nos la encontramos en el tubo eppendorf a 250 µM, se coje con una pipeta el volumen de riboflavina deseado y se introduce dentro del tubode ensayo y llenamos éste con Agua destilada hasta completar los 5 ml de cada tubo:
5 µM 0,1 ml de riboflavina y 4,9 ml de agua destilada
10 µM 0,2 ml de riboflavina y 4,8 ml de agua...