Espectrofotometría

ESPECTROFOTOMETRÍA
La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y biológicas.
La espectrofotometría se refiere a métodos cuantitativos de análisis químico que utilizan la luz para medir la concentración de las sustancias químicas. Se conocen como espectrofotometría de adsorción visible (colorimetría), ultravioleta, infrarroja.
Laespectrofotometría se basa en principios colorimétricos y comúnmente se usa para medir la concentración de dióxido de azufre. En este proceso, los colorantes y productos químicos se combinan con una solución que contienen dióxido de azufre. El color de la solución da lugar a diferentes cantidades de luz absorbida.  La cantidad de luz absorbida, medida con un espectrofotómetro, indica la cantidad de dióxidode azufre.
Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc) y estado de agregación (sólido, líquido, gas).
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosíntesis en plantas ybacterias.
La Mecánica Cuántica nos dice que la luz está compuesta de fotones cada uno de los cuáles tiene una energía:
Efotón = h= hc/
Donde:
c es la velocidad de la luz
 es su frecuencia
 su longitud de onda
h= 6.6 10-34 J×s es la constante de Planck.
Cuando decimos que una sustancia química absorbe luz de longitud de onda , esto significa que las moléculas de esa sustanciaabsorben fotones de esa longitud de onda.
Principio de la Espectrofotometría
Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe radiación de longitudes de ondas que no pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la región del infrarrojo.
La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas dependede la estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia química.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida; la energía radiante no puede producir ningún efecto sin ser absorbida.
El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellaslongitudes de onda no absorbidas.
La espectrofotometría ultravioleta-visible usa haces de radiación del espectro electromagnético, en el rango UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm y en el de la luz visible de 400 a 800 nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta y visible del espectro.
Al campo de luz UV de 200 a 400 nm se le conocetambién como rango de UV cercano, la espectrofotometría visible solamente usa el rango del campo electromagnético de la luz visible, de 400 a 800 nm.
Bourguer, Lambert y Beer establecieron relaciones de la variación de la intensidad de luz transmitida por una muestra con el espesor o con la concentración de ella, para materiales translúcidos. Estas relaciones se conocen como la ley deBourguer-Lambert-Beer. O la ley general de la espectrofotometría que permite hallar la concentración de una especie química a partir de la medida de la intensidad de luz adsorbida por la muestra. Esta ley se puede expresar en términos de potencia de luz o de intensidad de luz, asumiendo luz monocromática, como It/Io= 10 -abc . It es la intensidad de la luz transmitida, Io es la intensidad de luz que proviene dela fuente, a el coeficiente de absortividad molar , b la longitud de trayectoria del haz a través de la muestra.
La relación It/Io se conoce como transmitancia T , y es la medida primaria que se realiza en los instrumentos para medir la absorción de luz por parte de una muestra.
Ley de Beer
La Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de la concentración en...