Espectros De Fluorescencia De Aminoácidos Aromáticos Y Proteínas
Páginas: 8 (1897 palabras)
Publicado: 19 de octubre de 2012
Pontificia Universidad Católica de Valparaíso
Facultad de Ciencias Básicas y Matemáticas
Instituto de Química
Av. Brasil, nº 2950, Valparaíso
INFORME DE LABORATORIO Nº 2:
ESPECTROS DE FLUORESCENCIA
DE AMINOÁCIDOS AROMÁTICOS
Y PROTEÍNASINTEGRANTES: Katherine Henríquez
CURSO: Laboratorio QUI 259
PROFESOR: Juan Brunet
OBJETIVOS
• Estudiar los espectro de fluorescencia de los aminoácidos aromáticos Triptófano y Tirosina
• Obtener el espectro de fluorescencia intrínsecode una proteína y medir su rendimiento cuántico
• Observar el efecto de agentes desnaturalizantes de una proteína en el espectro de fluorescencia
FUNDAMENTO TEÓRICO
Emisión por Fluorescencia:
La fluorescencia es un proceso de emisión de importancia analítica basada en la excitación de átomos o moléculas por absorción de un haz de radiación electromagnética, sin multiplicidad delspin.
Uno de las características más atractivas de los métodos de fluorescencia es su sensibilidad inherente, la cual es, con frecuencia, de uno a tres órdenes de magnitud mejor que las de Espectroscopía de Absorción. No obstante los métodos de fluorescencia se aplican mucho menos que los métodos de absorción debido al nº relativamente limitado de sistemas químicos que se pueden hacerflourescer.
Teoría de Fluorescencia Molecular.
Normalmente, el tiempo de vida media de una especie excitada es breve por que hay diversas formas en las cuales un átomo o una molécula excitada liberan su exceso de energía y se relajan a su estado fundamental. Dos de los más importantes de estos mecanismos son la relajación (también llamada decaimiento, o desactivación) no radiante y la relajaciónfluorescente.
La relajación vibracional tiene lugar durante las colisiones entre moléculas excitadas y las moléculas del disolvente. Durante estas colisiones el exceso de energía vibracional se transfiere a las moléculas del disolvente. La ganancia de energía vibracional del disolvente se traduce en un ligero incremento de la temperatura del medio. La relajación vibracional es un proceso taneficiente que el tiempo de vida promedio de un estado vibracional excitado es de 10-15 s aproximadamente.
También puede ocurrir el relajamiento no radiante entre el nivel vibracional inferior de un estado electrónico excitado y el nivel vibracional superior de otro estado electrónico. Este tipo de relajación es llamado a veces Conversión Interna.
Por último puede producirse la relajaciónradiante o Fluorescencia. Se puede observar que las bandas de radiación son producidas cuando las moléculas fluorescen debido a que éstas se pueden relajar a cualquier estado vibracional del estado electrónico fundamental. De igual forma que las bandas de absorción molecular, las bandas de fluorescencia molecular están formadas por una multitud de líneas espaciadas tan estrechamente que son muydifíciles de resolver.
El camino más probable hacia el estado fundamental es aquel que minimiza el tiempo de vida media del estado excitado. Por tanto, si la desactivación por fluorescencia es rápida con respecto a los procesos sin radiación, se observa tal emisión. Por otro lado, si un camino sin radiación tiene una constante de velocidad favorable, la fluorescencia no tiene lugar o esmeros intensa.Rendimiento Cuántico:
El Rendimiento o Eficiencia Cuántica de la fluorescencia molecular es el cuociente entre el nº de moléculas que presentan fluorescencia y el nº total de moléculas excitadas (o el cuociente entre fotones absorbidos y fotones emitidos).
La escala de rendimiento cuántico van desde 1para especies muy fluorescentes (fluoresceína) hasta prácticamente 0 para especies no...
Facultad de Ciencias Básicas y Matemáticas
Instituto de Química
Av. Brasil, nº 2950, Valparaíso
INFORME DE LABORATORIO Nº 2:
ESPECTROS DE FLUORESCENCIA
DE AMINOÁCIDOS AROMÁTICOS
Y PROTEÍNASINTEGRANTES: Katherine Henríquez
CURSO: Laboratorio QUI 259
PROFESOR: Juan Brunet
OBJETIVOS
• Estudiar los espectro de fluorescencia de los aminoácidos aromáticos Triptófano y Tirosina
• Obtener el espectro de fluorescencia intrínsecode una proteína y medir su rendimiento cuántico
• Observar el efecto de agentes desnaturalizantes de una proteína en el espectro de fluorescencia
FUNDAMENTO TEÓRICO
Emisión por Fluorescencia:
La fluorescencia es un proceso de emisión de importancia analítica basada en la excitación de átomos o moléculas por absorción de un haz de radiación electromagnética, sin multiplicidad delspin.
Uno de las características más atractivas de los métodos de fluorescencia es su sensibilidad inherente, la cual es, con frecuencia, de uno a tres órdenes de magnitud mejor que las de Espectroscopía de Absorción. No obstante los métodos de fluorescencia se aplican mucho menos que los métodos de absorción debido al nº relativamente limitado de sistemas químicos que se pueden hacerflourescer.
Teoría de Fluorescencia Molecular.
Normalmente, el tiempo de vida media de una especie excitada es breve por que hay diversas formas en las cuales un átomo o una molécula excitada liberan su exceso de energía y se relajan a su estado fundamental. Dos de los más importantes de estos mecanismos son la relajación (también llamada decaimiento, o desactivación) no radiante y la relajaciónfluorescente.
La relajación vibracional tiene lugar durante las colisiones entre moléculas excitadas y las moléculas del disolvente. Durante estas colisiones el exceso de energía vibracional se transfiere a las moléculas del disolvente. La ganancia de energía vibracional del disolvente se traduce en un ligero incremento de la temperatura del medio. La relajación vibracional es un proceso taneficiente que el tiempo de vida promedio de un estado vibracional excitado es de 10-15 s aproximadamente.
También puede ocurrir el relajamiento no radiante entre el nivel vibracional inferior de un estado electrónico excitado y el nivel vibracional superior de otro estado electrónico. Este tipo de relajación es llamado a veces Conversión Interna.
Por último puede producirse la relajaciónradiante o Fluorescencia. Se puede observar que las bandas de radiación son producidas cuando las moléculas fluorescen debido a que éstas se pueden relajar a cualquier estado vibracional del estado electrónico fundamental. De igual forma que las bandas de absorción molecular, las bandas de fluorescencia molecular están formadas por una multitud de líneas espaciadas tan estrechamente que son muydifíciles de resolver.
El camino más probable hacia el estado fundamental es aquel que minimiza el tiempo de vida media del estado excitado. Por tanto, si la desactivación por fluorescencia es rápida con respecto a los procesos sin radiación, se observa tal emisión. Por otro lado, si un camino sin radiación tiene una constante de velocidad favorable, la fluorescencia no tiene lugar o esmeros intensa.Rendimiento Cuántico:
El Rendimiento o Eficiencia Cuántica de la fluorescencia molecular es el cuociente entre el nº de moléculas que presentan fluorescencia y el nº total de moléculas excitadas (o el cuociente entre fotones absorbidos y fotones emitidos).
La escala de rendimiento cuántico van desde 1para especies muy fluorescentes (fluoresceína) hasta prácticamente 0 para especies no...
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