Espectroscopía De Fluorescencia Molecular

ESPECTROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA MOLECULAR.
Determinación de quinina en agua tónica



Resultados y discusión

Curva de calibrado

1. Preparación de todas las disoluciones utilizadas como reactivos iniciales

1.1 Disolución de 1L H2SO4(0.05M)

Datos: Mm (H2SO4)=98.078 g/mol
Reactivos iniciales:
H2SO4 96% (p/p), ρ = 1.835 g/ml

Volumen necesario:

n = 0.05mol → m (H2SO4) = Mm·n = 98.078 g/mol·0.05mol = 4.9039 g
m (total) =m(H2SO4)/0.96=5.1082g
V = m/ ρ = 5.1082g/1.835g/ml = 2.784 mL → V ≈ 2.8 mL (H2SO4)

1.2 Disolución patrón de quinina, 100mL a 1000 mg/L

m (quinina) = 100 mg = 0.100 g
m (quinina)2xH2SO4x H20 =[(782.96g/mol[(quinina)·2H2SO4·H2O])/2x324.43g/mol[quinina]]·m

m[(quinina)2xH2SO4x H20] necesaria = 0.1207 g
m (pesada) =0.1209 ± 0.0001 g
Concentración de quinina real: 1002 mg/L
Volumen final: 100.0 ± 0.1 mL
Concentración resultante: 1002 ± 1 mg/L

1.3Disolución de quinina, 100 mL a 50 mg/L

Disolución preparara a partir de la anterior.
V necesario =50mg/L·100mL /1002mg/L=4.99mL
Valor más próximo apreciable y medible con los instrumentos disponibles: 5.00 ± 0.015 mL
Concentración de quinina: 50.10 mg/LVolumen final: 100.0 ± 0.1 mL
Concentración resultante: 50.1 ± 0.2 mg/L

2. Justificar la elección de las longitudes de onda de emisión y excitación para la determinación de la quinina.

A la vista del espectro de absorción de la quinina (incluído en el guión de la práctica), presenta dos máximos de absorción, uno a 250 nm y otro a 347 nm, por lo que la longitud de onda de excitación deberásituarse entorno a uno de estos máximos.
En cuanto al espectro de excitación hay que aclarar que el máximo que aparece a 452 nm se debe a radiación residual de la lámpara. El máximo de absorción de la quinina se produce a 349.5 nm.
Para el espectro de emisión , aparecen dos máximos. El de 347 nm se debe a la radiación de la lámpara, y el de 451 nm es el propio de la quinina.
Hay que tener encuenta que, aunque sea más intenso el pico de absorción de 250 nm, no da lugar a una fluorescencia óptima, de forma que se escogerá el valor de 349.5 nm para la longitud de onda de excitación, y de 451 nm para la emisión.

3. Construir una tabla en la que se indiquen para cada una de las disoluciones patrón de la curva de calibrado, su preparación a partir de la disolución patrón de quininade mayor concentración, concentración de las disoluciones (en mg/L), la intensidad de fluorescencia medida y las correspondientes intensidades de fluorescencia corregidas frente al blanco medido.

Disoluciones patrón de quinina

Volúmenes finales: 50.00 ± 0.06 mL en todos los casos

Concentración de quinina (mg/L) | Masa de quinina en disolución (mg) | Volumen necesario de disoluciónpatrón de 50 p.p.m (mL) | Concentración final de quinina(mg/L) | Intensidad de la señal | Señal- blanco |
0.1 | 5x10^-3 | 0.1 | 0.1000 ± 0.0007 | 96.02 | 94.83 |
0.3 | 1.5x10^-2 | 0.3 | 0.300 ± 0.002 | 210.5 | 209.3 |
0.5 | 2.5x10^-2 | 0.5 | 0.500 ±0.004 | 325.4 | 324.2 |
0.7 | 3.5x10^-2 | 0.7 | 0.700 ±0.005 | 469.8 | 486.6 |
1.0 | 5x10^-2 | 1.0 | 1.000 ±0.007 | 627.3 | 622.5 |
0.0(Blanco) | 0 | 0 | 0 | 1.188 | 0.000 |

4. Representar los valores de intensidad de fluorescencia frente a la concentración de quinina, para cada una de las disoluciones patrón. Ajustar la recta obtenida por mínimos cuadrados, indicando parámetros de dicha recta y el valor del coeficiente de correlación.

Donde 'Y' es la intensidad de la señal instrumental, y 'X' representa la concentración dequinina, en mg/L.

Contenido de quinina en agua tónica

1. Indicar la preparación de las disoluciones diluidas de la muestra así como sus intensidades de fluorescencia medidas.

La muestra inicialmente es desgasificada para evitar que haya pequeñas burbujas de gas en la cubeta a la hora de realizar las medidas, y dado que la concentración aproximada de quinina en la bebida comercial es...