Establecimiento de cultivos primarios de enterocitos de ratón

“Establecimiento de cultivos primarios de enterocitos de ratón”

“Establecimiento de cultivos primarios de enterocitos
de ratón”
Bajo la dirección de la Dra. Cecilia Muglia en el Laboratorio de Investigación del
Sistema Inmune.

Fiorella Di Claudio

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A mamá, papá
y Ornella
A todos mis familiares
y amigosQuiero expresar mis más sinceros agradecimientos:

Fiorella Di Claudio

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A mis directores Prof. Dr. Guillermo Docena y Prof. Dra. Cecilia Muglia
por darme la oportunidad de conocer el interesante mundo de la
investigación científica, por enseñarme todo lo que hice en este trabajo
y por toda su dedicación y suafecto.
A todos los que trabajan en el LISIN, quienes me ayudaron en los
primeros pasos en los cuales suelen encontrarse mayores dificultades y
con quienes compartimos almuerzos, meriendas, mates y amenas
charlas. Especialmente a Rodrigo, Nicolás y Paola quienes respondieron
a todas mis consultas sin importar la hora.
Fue un hermoso camino de aprendizaje y reflexión.

¡Muchas Gracias atodos!

Fiorella Di Claudio

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Introducción

Cultivo Celular:
El cultivo de células in vitro consisten en un sistema formado por células provenientes de un
órgano o un tejido, normal o tumoral, mantenidas en medios de cultivo de composición
química definida y en condiciones de temperatura, pH, aireación y humedadcontroladas. De
Fiorella Di Claudio

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esta forma se aseguran su supervivencia y multiplicación, manteniendo todas sus funciones
metabólicas de una manera semejante a las que tenían en el tejido original.
El cultivo celular tuvo su origen en el siglo XIX, como un método para el estudio del
comportamiento de lascélulas animales libres de las variaciones sistémicas ocurridas
dentro del organismo y bajo el estrés de un experimento.
Cuando el cultivo proviene de células que han sido disgregadas de un tejido original extraído
de un animal sacrificado, recibe el nombre de Cultivo Primario. Los cultivos primarios
tienen características especiales que los diferencian de las líneas celulares: conservan lamorfología de las células del órgano del que fueron aisladas, sus cromosomas tienen un
número diploide, su crecimiento in vitro es limitado y hay inhibición por contacto. En
general, se espera que las células en cultivo primario retengan la mayoría de las
características fisiológicas de las células originales.
Los cultivos de células animales también se pueden clasificar de acuerdo a su capacidad deadherencia o no a una superficie determinada, pudiendo crecer en forma de monocapa o en
suspensión. Las células que tienen la capacidad de adherirse en monocapa lo hacen
mediante receptores celulares específicos a la superficie de la matriz extracelular. (Moore,
1994)
El crecimiento de las células en un cultivo primario depende de la supervivencia de éstas a
la técnica de disgregaciónutilizada y a la capacidad de adherirse al sustrato. En este
sentido, la dificultad en el cultivo primario de enterocitos reviste en el hecho de que la
mayor parte de la población celular enterocítica no sobrevive a la extracción de la mucosa y
mueren en el mismo momento en que son extraídas (Rogler, Daig 1998). Por otra parte, las
células con alta capacidad de proliferación se encuentran en lascriptas de la mucosa
intestinal, por lo que el desafío del cultivo primario de estas células radica en la obtención
de un número alto de células madre precursoras de la estirpe enterocítica. Durante el
desarrollo de este trabajo aspiramos a demostrar la necesidad de un soporte físico para la
sobrevida de las células ligada fuertemente a la adhesión al mismo. Con este fin se
utilizaron dos...