Esterilización De Material Y Medio De Cultivo

Microbiología
Tema: Esterilización de Material y Medio Cultivo

Practica de Laboratorio Nª1
Tema: Esterilización de Material y Medio de Cultivo

1. Objetivos

* Conocer el método de esterilización y trabajar en una área de asepsia
* Observar el efecto de las condiciones de asepsia en el control de la contaminación microbiana en el laboratorio.
* Lavar preparar y envolvercorrectamente el material que se someterá a esterilización.

2. Marco Teórico
Esterilización
* Esterilización: eliminación o muerte de todos los microorganismos que contiene un objeto o sustancia, y que se encuentran acondicionados de tal forma que no pueden contaminarse nuevamente.
* Sanitizante: agente que disminuye la carga microbiana total a un nivel el cual es seguro para lasalud de la población. Sólo es aplicable sobre objetos inanimados.
* Desinfectante: agente que elimina la carga microbiana total en superficies inanimadas tales como habitaciones.
* Antiséptico: agente que controla y reduce la presencia de microorganismos potencialmente patógenos sobre piel y/o mucosas (sólo pueden aplicarse externamente sobre seres vivos).

Esterilizantes
1. Provocanpérdida de la viabilidad en los microorganismos

 Físicos (calor, radiaciones)
Químicos (óxido de etileno, agentes oxidantes, soluciones antisépticas.)
 
2. Provocan una separación de los microorganismos de la sustancia líquida

Filtración (se eliminan los microorganismos presentes en un fluido).
 

 

Calor
Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accióndel calor. El calor provoca desnaturalización de proteínas, fusión y desorganización de las membranas y/o procesos oxidativos irreversibles en los microorganismos.
La efectividad del calor como método de esterilización depende de:
* Temperatura
* Tiempo de exposición
 
* Calor Húmedo
El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas. Estos efectos se debenprincipalmente a dos razones:
* El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras biológicas (DNA, RNA, proteínas, etc.) son producidas por reacciones que eliminan agua. Por lo tanto, reacciones inversas podrían dañar a la célula a causa de la producción de productos tóxicos. Además, las estructuras secundarias y terciarias de las proteínas se estabilizan mediante uniones puente dehidrógeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas y rotos por el agua a altas temperaturas.
* El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más elevado que el aire. Por lo que, los materiales húmedos conducen el calor mucho más rápidamente que los materiales secos debido a la energía liberada durante la condensación.
La autoclave es el aparato más comúnmenteutilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua y que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 °C. Una temperatura de 121 °C (una atmósfera de sobrepresión) con un tiempo de exposición mayor a 15 minutos sirve para destruir organismos formadores de esporas.

Presión
[atm] | Temperatura
[°C] |
| Descarga completa del aire |Descarga de 2/3 del aire | Descarga de 1/2 del aire | Sin descarga del aire |
1/3 | 109 | 100 | 90 | 72 |
2/3 | 115 | 109 | 100 | 90 |
1 | 121 | 115 | 109 | 100 |
4/3 | 126 | 121 | 115 | 109 |
5/3 | 130 | 126 | 121 | 115 |
2 | 133 | 130 | 126 | 121 |
Influencia de la descarga incompleta de aire en la temperatura del autoclave
 

Ventajas
* Rápido calentamiento y penetración
*Destrucción de bacterias y esporas en corto tiempo
* No deja residuos tóxicos
* Hay un bajo deterioro del material expuesto
* Económico

Desventajas
* No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua
* Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos

 

* Calor Seco
El calor seco produce disecación de la célula, efectos tóxicos por niveles elevados...