Estructura basica de programacion
Finalidad.
Para diagnóstico de microorganismos positivos y/o negativos a la tinción de Gram mediante el método de coloracióndiferencial en frotis.
Metodología
El procedimiento para la tinción diferencial de Gram distingue 2 grupos de células. Las que retienen el colorante primario son llamadas Gram-positivas y las quepierden el colorante primario y toman el color del colorante de contraste, las cuales son llamadas Gram-negativas.
El mecanismo se basa en las características fisicoquímicas de las estructuras de la paredcelular de los microorganismos. Una probable teoría del mecanismo de acción es el siguiente:
El colorante básico entra al microorganismo, donde forma con el Yodo una laca insoluble en agua. Elalcohol acetona empleado para aclarar, deshidrata las paredes de los microorganismos Gram-positivos, tratados con mordiente forman una barrera que la laca no puede atravesar.
En las célulasGram-negativas, los lípidos de la pared (más abundantes que en las células Gram-positivas) se disuelven por este tratamiento, lo que permite el escape de complejo de cristal violeta con yodo.
Reactivos1. Violeta de Genciana
2. Gram Yodo
3. Safranina
4. Alcohol acetona
Procedimiento
1. Preparar y fijar un frotis de la muestra por analizar, pasándola suavemente en la flama de unmechero.
2. Cubrir con un colorante de Violeta de Genciana. Esperar 1 minuto.
3. Escurrir el colorante de Violeta de Genciana sin enjuagar y cubrir con solución Gram Yodo. Esperar un minuto.4. Lavar con solución de Alcohol acetona hasta decoloración.
5. Sacudir para evaporar el resto de Alcohol acetona.
6. cubrir el frotis con colorante de Safranina. Esperar un minuto.
7.Lavar repetidas veces con agua corriente hasta que no haya restos de colorante.
8. Secar y observar al microscopio.
Resultados
Los microorganismos Gram-positivos se tiñen de morado,...
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