Estud

TECNICAS HISTOLOGICAS
Preparación Del tejido (tinción con hematoxilina y eosina fijada con formalina)
1. Obtención del tejido:
2.1. Biopsias, autopsia, necropsia
2. Fijación:
3.2. Se obtiene mediante el empleo de sust. Químicas individuales o mezcladas.
3.3. Las muestras tienen que ser sumergidas inmediatamente despues de ser extraidas del organismo
3.4. Seutiliza para:
3.5.1. Fijadores:
Tecnica histológica
* Formol
* alcohol
Microscopia electrónica
* glutaraldehido
* tetraoxido de osmio
Fijadores:
Tecnica histológica
* Formol
* alcohol
Microscopia electrónica
* glutaraldehido
* tetraoxido de osmio
Abolir el metabolismo celular
3.5.2. Impedir la degradación enzimática de las células y lostejidos por autolisis
3.5.3. Destruir los microrganismos patógenos
3.5.4. Endurecer el tejido como consecuencia de la creación de enlaces cruzados
3.5.5. Estabilización de proteínas
3.5. Fijador mas común es la formalina
3.6.6. Solución acuosa de formaldehido al 37%
3.6.7. No reacciona con lípidos/mal fijador de la membrana
3.6.Deshidratacion
3.7.8. Objetivo: Retirar del tej. El h20 mol y sust por parafina
3.7.9.1. Aumentsr la consistencia y resistencia del tejido para poder cortarlo
3.7.9. Histoquinet
3.7.10.2. Aparato que sirve para la deshidratación de tejidos
3.7.10.3.1. Alcohol, alcohol 96 º, formol, Xilol, Parafina
3.7.10. Para el aclarado despues de ladeshidratación se utilizan solventes organicos (xileno o tolueno).
3.7.11. Eliminar el alcohol al 100% antes de infundir parafina
3. Corte/inclusion:
4.7. Se incluye la muestra en parafina fundida a 60º
4.8. Cunado el tejido con aprafina se ha enfriado y endurecudo se empareja y forma un bloque(taco).
4.9. Microtomo
4.10.12. Maquina utilizada paracortar tejidos
4.10.13. Cuchilla de acero de 3 a 5 micras
4.10.14. Cortes de 5 a 15 micras
4.10. El corte se coloca en una laminilla
4.11. Desparafinar
4.12.15. Se utiliza xileno o tolueno
4.12. Hidratación
4.13.16. Uso de alcoholes
4. Tincion/coloracion:
5.13. Hematoxilina
5.14.17. Tinción básica
5.14.18.3.Tejido fijado y parafinado
* Mejor preservación de la morfología
* Realización de múltiples tinciones de HQ e IHQ
* Extracción de lípidos
* Inactivación enzimática
* 13 horas de procesamiento
Tejido fijado y parafinado
* Mejor preservación de la morfología
* Realización de múltiples tinciones de HQ e IHQ
* Extracción de lípidos
* Inactivación enzimática
*13 horas de procesamiento
Afinidad por las sust básicas
5.14.18.4. Carácter basofilo
5.14. Eosina
5.15.18. Tincion acidad
5.15.19.5. Afinidad sustancias básicas
5.15.19.6. Carácter acidofilo
5.15. Despues de la tinción el tejido se deshidrata se monta y cubre en la laminilla listo para su orbservacion
Congelamiento
* Produceartificios.
* Realización de IFA.
* Preserva lípidos y enzimas.
* Rápido, 10 a 15 minutos
Congelamiento
* Produce artificios.
* Realización de IFA.
* Preserva lípidos y enzimas.
* Rápido, 10 a 15 minutos
Procesamiento por congelación
1. Obtención del tejido
2. Congelación
3.1. Criostato
3.2.1. Aparato que permite congelar tejidos
3.2. Secongelan medite el uso de anhidrico carbonico o isopentano a una temperatura de -50ºc.
3. Corte
4.3. Microtomo
4. Tinción
5.4. Se realiza para diferenciar los nucleos celulares
5.5. No es necesario utilizar alcohol y xilol
5.6. Tinciones:
5.7.2. Hematozila y eosina
5.7.3. Azul de toluidina
5.7.4. Rojo oleoso
5.7.5. Azul...