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PCR (Polymerase chain reaction)
Reacción en cadena de
la polimerasaDefinición
La reacción en cadena de la polimerasa, ya más
conocida como PCR, es una técnica que permite
replicar entrecientos de miles y millones de veces,
en el transcurrir de pocas horas e in vitro,
pequeñas cantidades de ADN.Etapas de la PCR
1- Desnaturalización del ADN doble cadena.
2- Hibridación de losiniciadores a la zona 3´
específica de cada una de las hebras.
3- Extensión del cebador por actuación de la
DNA polimerasa.Para que el proceso se lleve a cabo en el tubo de reacción debemosencontrar:
a- ADN objetivo ( el que se quiere amplificar)
b- ADN Polimerasa
c- Deoxinucleótidos
d- PrimersPara replicar el ADN, la técnica PCR hizo uso, en un principio, de la
ADN polimerasa de labacteria Escherichia coli. Pero esta enzima
resulta desactivada debido a la alta temperatura requerida para
desnaturalizarla doble cadena del ADN, por lo cual debía agregarse
enzima fresca alcomenzar el tercer paso de cada ciclo. Este
inconveniente fue solucionado de manera ingeniosa cuando se la
reemplazó por su equivalente de la bacteria "termófila" Thermus
aquaticus. En efecto, laADN polimerasa de este microrganismo,
denominada Taq polimerasa, actúa eficientemente entre los 75° C y
los 80° C y resiste más de dos horas a 93° C. De es ta manera es
posible mezclar todos loscomponentes de la PCR al comenzar el
primer ciclo y la reacción en cadena puede llevarse a cabo mediante
equipos automatizados que realizarán los ciclos térmicos
programados.Los primers,también conocidos como “iniciadores” o
“cebadores”, son cadenas cortas de nucleótidos
(oligonucleótidos). Cada uno de ellos debe ser complementario del
tramo al que tienen que unirse en las cadenasseparadas del ADN
objetivo. Es importante aclarar que los primers no deben ser
complementarios entre sí para evitar la propia replicación.Deoxiadenosina trifosfato
Deoxicitidina trifosfato...