Estudiante

Practica#1
Dot-Blot

El Dot-Blot es una técnica de detección de biomoleculas, los ensayos de hibridación pueden clasificarse en hibridación en fase liquida e hibridación en soporte solido ( DotBlot) , la última es la más sencilla de realizar y permite procesar varias muestras simultáneamente , la técnica de Dot Blot posibilita mediante hibridación una detección cualitiativa(sólo puedeconfirmar la presencia o ausencia de una biomolécula o biomoléculas que pueden ser detectados por las sondas)  del agente infecioso en una muestra de estudio , emplea un soporte solido como membranas,filtro de nylon o nitrocelulosa , la muestra se aplica gota a gota sobre el filtro .
Tipos de Dot-Blot
-ASO dot blot
Esta técnica, cuyas siglas ASO vienen del inglés Allele Specific Oligonucleotides,constituye una de las metodologías que aplican la estrategia dot blot, es decir, la deposición de muestras con las moléculas de interés sobre una membrana para, posteriormente, revelar los resultadosde presencia o ausencia de los elementos de estudio mediante marcaje con sondas dirigidas contra dichos elementos.
Este método consiste en amplificar el ADN de interés (por PCR por ejemplo) y fijarlodirectamente a la membrana de trabajo (por ejemplo con irradiación UV), para luego añadir oligonucleótidos de unas 20 pb específicos del alelo que quiere detectarse. Estos oligos son marcadospreviamente con radiactividad, fluoróforos o cualquier otro tipo de marcaje. Tras la hibridación, se obtienen los resultados detectando el marcaje utilizado.
Una aplicación directa de este protocolo es ladetección de mutaciones, de manera que se fija una fila de muestras, cada una correspondiente a un individuo diferente, del cual se ha amplificado la región de ADN que puede o no contener la mutación-ASO dot blot inverso
Se basa en el mismo procedimiento metodológico que en el ASO dot blot, con la salvedad de que son los alelos las moléculas fijadas a la membrana, mientras que el ADN del...