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1. 2. Principio de la cromatografía de filtración en gel
Con la cromatografía de filtración en gel se separan moléculas en virtud de sus diferencias de tamaño. La capacidad separadora reside en elgel cuya matriz consta de un gran número de esferas porosas microscópicas. Estas esferas están constituidas por largas cadenas de polímeros unidas entre si por enlaces químicos para formar una redtridimensional. El gel, una vez hidratado, se deposita adecuadamente en una columna hueca de vidrio (Fig. 1) quedandol isto para su uso.

En el interior de una columna de cromatografía puedendistinguirse varios volúmenes (Fig. 2):

a) El volumen total (Vt), que es el volumen que ocupa el cilindro de gel hidratado.
b) El volumen de vacío (Vo), o el volumen existente entre las esferas delgel.
c) El volumen ocupado por las esferas del gel, que se expresa como la diferencia entre los dos volúmenes anteriores: Vt-Vo.
Cuando una mezcla de moléculas de diferentes tamaños se hace pasara través de la columna de gel, se produce la separación en virtud del siguiente principio:
- Las moléculas de muy pequeño tamaño penetran en el interior de las esferas que componen el gel y, porconsiguiente, no son extraídas de la columna hasta que no ha pasado a través de ella un volumen de líquido igual a su volumen total (Vt). Sin embargo, aquellas moléculas cuyo tamaño es mayor que el delos poros de las esferas del gel, no pueden penetrar en su interior y
atraviesan la columna recorriendo únicamente el volumen vacío (Vo), siendo las primeras en salir de la columna. El resto de lasmoléculas, de tamaño intermedio, presentan una mayor o menor facilidad para difundir al interior de las esferas en función de su tamaño, siendo extraídas fraccionadamente con volúmenes que estáncomprendidos entre el Vt y el Vo.
Cuanto mayor es una molécula, menos capacidad tiene para acceder al interior de las esferas del gel y, por tanto, menor es el volumen de líquido que se requiere para...