Estudiante

Cultivo de tejidos vegetales

Nombre: Raquel Merino Fecha: 19-09-2012

Técnicas de Esterilización
La esterilización no es más que el proceso de eliminar de un material específico, espacio físico o superficie, todo tipo de microrganismo o espora. A este proceso también se lo conoce como aséptico en el área de cultivos de tejidos. Esto se consigue, mediante métodos físicos, así comotambién métodos químicos (desinfección). El proceso de eliminación de virus, viroides o micoplasmas, se conoce como axénico. La asepsia interna en el explante está siempre presente, por lo que el proceso de esterilización se lleva acabo en todo lo que es el área externa de la misma (esterilización superficial), es por eso que a continuación se realizará la explicación de los métodos tanto físicoscomo químicos del proceso.

1) Métodos Químicos

* Hipoclorito de sodio (NaOCl): Este tipo de solución se encuentra en concentraciones de entre 1-3%. Es muy utilizado en esterilizante superficial de tejidos vegetales. Sus principales características, es que actúa como agente germicida y oxidante, con respecto a la esterilización superficial de materiales de todo tipo. La desventaja deesta solución es que puede producir lesiones y oxidación en concentraciones altas o falta de un adecuado enjuague. Para esto lo que se hace es en algunos casos es un enjuague rápido con agua acidulada (HCl). Entre las ventajas tenemos que es fácil de eliminar después de la esterilización.
* Bicloruro de mercurio (HgCl2): Esta solución es también utilizada en cultivo de tejidos, pero enmenor grado debido a su alto grado de toxicidad y corrosidad y debido al cuidadoso manejo que se debe tener durante el trabajo de esterilización. Las concentraciones adecuadas varían entre 0.1 a 1.5% (p/v) y el tiempo de exposición para el proceso de esterilización se da entre los 3-10 minutos. Otra de las desventajas que existen es que es difícil de eliminar luego del enjuague.
* Alcohol(etanol): Es un agente esterilizador común para eliminar bacterias y hongos y frecuentemente. El principal procedimiento que se realiza, es un lavado breve de 30 minutos antes de aplicar otros tratamientos de esterilización de superficie. Debido a su baja tensión superficial por la cual puede penetrar fácilmente entre las pilosidades foliares y mojar la superficie de la planta. Etanol de 70% esmucho más efectiva al esterilizar que el de 95-100%.
* Bactericidas y fungicidas: Para material altamente contaminado, se recomiendan el lavado en una mezcla comercial bactericida / fungicida antes de proceder a la esterilización de su superficie. Debe tomarse en cuenta que este tipo de tratamiento no tiene efecto en lo que respecta a infecciones sistemas, por lo que se debe utilizar otro tipo deesterilizantes superficiales.

* Usa de Antibióticos: En cultivo de tejidos vegetales, los antibióticos solo son empleados cuando los microorganismos no pueden ser eliminados par otros métodos. Estos compuestos son caros y no existe ninguno que será efectivo para controlar todos los organismos contaminantes. Así también existe la posibilidad de reportes de toxicidad causada en algunoscultivos por: Penicilina, Estreptomicina, Bactericina y Sparsomicina. Antes de decidir utilizar antibióticos se recomienda eliminar todas las posibles fuentes de contaminación.
Las siguientes combinaciones de antibióticos se han aplicado con éxito en cultivo de tejidos de plantas:
* Cefotaxime, Gentainicina, Rifampicina, Nystatina + Carbenicilina, Gentamicina + Amphotericina B,Vancomicina HCI + Mycostatin and Streptoinicina + Carbenicilina.

2) Métodos físicos
El calor es el agente de esterilización más utilizado, debido a que la experimentación ha demostrado que el tratamiento de plantas con temperaturas elevadas (termoterapia) lleva una reducción en la concentración del virus en la planta. Entre los principales métodos tenemos de llama directa, calor húmedo (vapor) o...