Estudio Cinético Del Enzima Alfa – Amilasa

ESTUDIO CINÉTICO DEL ENZIMA ALFA – AMILASA: EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN, EL pH Y LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN ENZIMÁTICA.

Palabras clave: almidón, enzima, alfa amilasa, temperatura, pH, reacción, velocidad, desnaturalización, tiempo, lugol.

RESUMEN

La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzima; la velocidad de una reacción puedemedirse mediante condiciones óptimas de pH, temperatura, concentración del sustrato del enzima y el tiempo de reacción, utilizando el lugol como una herramienta útil ya que el almidón en presencia de esta solución adquiere una coloración azulada. Cuando se realizó la prueba de pH para medir la reacción se pudo observar que con pH 7.0 la prueba del lugol dio negativa, es decir se tornó de colorazul, mientras que en pH 4.0 no dio negativo a tal prueba, esto debido a que existe un rango de pH que admite la enzima, y si se pasa de estos rangos esta se desnaturaliza y deja de actuar. También la temperatura es un factor clave para la determinación de la cinética enzimática, puesto que la elevación de la temperatura incrementa la velocidad, esto es porque se incrementa la energía cinética delas moléculas reactantes, pudiéndose observar que la que la muestra que se puso a hervir dio negativo a la prueba de lugol más rápido que la que se dejó a baño de hielo como era de esperarse. Cuando hay mayor cantidad de sustrato, se espera una mayor rapidez de reacción, al igual que con la cantidad de enzima, pero cuando se realizó la primera prueba no se pudo ver un rango de velocidad ya que laenzima utilizada afecto el transcurso de la reacción.



1. Resultados

Tabla 1. Estudio del efecto de la [E] sobre la velocidad de la reacción enzimática

Tiempo (min) Observaciones
0 Todos las muestras dieron positivas al lugol.
10 El tubo numero 3 dio negativo al lugol, mientras que los tubos 1,2 y 4 seguían siendo positivos a este.
20 El tubo numero 4 reacciono de forma negativaal lugol.
30 Los tubos 1 y 2 dieron negativos al lugol

Tabla 2. Estudio del efecto del pH sobre la velocidad de la reacción enzimática.

Tiempo (min) Observaciones
10 La solución buffer pH 7,0 dio negativa al lugol mientras que la de pH 4,0 dio positiva al lugol
20 La solución buffer pH 4,0 dio positiva al lugol
30 La solución buffer de pH 4,0 dio positiva al lugol

Tabla 3.Estudio del efecto de la [S] sobre la velocidad de la reacción enzimática

Tiempo (min) Observaciones
10 Los 4 tubos de ensayo dieron negativas al lugol.

Tabla 4. Estudio del efecto de la temperatura sobre la velocidad de la reacción enzimática.

Tiempo (min) Observaciones
5 El tubo número 1, es decir el tubo que se dejó hervir, dio negativo al lugol.
10 El tubo numero 2 incubado a 40°C dionegativo al lugol, al igual que el tubo que se dejó a baño de hielo.

Tabla 5. Estudio del efecto del tiempo sobre la velocidad de la reacción enzimática

Tiempo (min) Observaciones
0 La reacción se tornó de color café oscuro
3 La reacción acogió un color café un poco más claro que el de la anterior.
5 La reacción se empezó a tornar de un color más claro como el anaranjado.

2. Análisisde Resultados

La alfa amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana catalizada por la degradación del almidón, que es un polisacárido de reserva vegetal. El almidón está formado por dos tipos de moléculas: la amilosa y la amilopectina, ambos polisacáridos de glucosa. La amilosa se conforma por cadenas lineales de glucosa unidas por enlaces alfa-C1-C4, mientras que laamilopectina tiene, además de estos últimos enlaces, uniones C1 con C6, formando cadenas ramificadas. La alfa amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la amilasa como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales y ramificadas como productos.

Para medir la actividad enzimática de la alfa amilasa se utiliza una solución de yoduro de potasio (lugol), ya que el almidón en presencia de esta solución...