estudio cinetico de la ureasa


PRACTICA 4: ESTUDIO CINETICO DE LA UREASA
RESUMEN
La ureasa (EC 3.5.1.5) es una enzima que cataliza la hidrólisis de urea a dióxido de carbono y amoníaco. La reacción ocurre de la siguientemanera: (NH2)2CO + H2O → CO2 + 2NH3
Peso molecular: 480 kDa o 545 kDa para la ureasa de frijol.
Metal en el sitio activo: Niquel(II).
pH óptimo : 7.24534219998
Temperatura óptima: 50 °CEspecificidad enzimática: urea y agua.
Inhibidor enzimático: metales pesados.
En la prueba de la ureasa, esta será degradada por aquellos microorganismos capaces de producir el enzima ureasa. Esta degradaciónproduce amoniaco que hará variar el color del indicador de amarillo a rojo, poniéndose así de manifiesto la actividad ureasa. Existen varios métodos de hidrólisis de urea, de entre los cuales, los másempleados son los básicos y aquellos que utilizan a la enzima ureasa. Las proteínas contienen grupos –SH libres en sus cadenas laterales, los cuales pueden ser directa o indirectamente responsables dela acción catalítica de la enzima. Bajo determinadas condiciones las enzimas pueden experimentar cambios irreversibles en su conformación. Cuando esto ocurre, las propiedades catalíticas se pierden,hay un descenso brusco en la solubilidad y cambios en las propiedades físicas y químicas que pueden ser observados.
Para revelar el resultado de esta prueba es importante tener en cuenta el tiempo deincubación ya que especies de Proteus vuelven alcalino el medio poco después de la inoculación y sus resultados deben ser leídos en las primeras 2-6 horas, mientras que Citrobacter freundii yKlebsiella pneumoniae tienen actividad ureasa dentro de las 24-48 horas de incubación.
Los tioles son análogos sulfurados de los alcoholes, en los que el atomo de oxigeno se ha sustituido por un atomo deazufre. El grupo funcional es el sulfhidrilo (-SH) o simplemente “tiol”. Los tioles se conocían antiguamente como mercaptanos. Su fórmula general es R-SH. La capacidad catalítica de las Enzimas (40%)...