Estudio De Algunos Factores Que Afectan El Establecimiento De Un Método Espectrofotométrico

“Estudio de algunos factores que afectan el establecimiento de un método espectrofotométrico.”



* Objetivos:

a) Seleccionar tubos comunes de laboratorio para usarlos como cubetas para el espectrofotómetro.
b) Manejar algunos de los parámetros que intervienen en el establecimiento de un método espectrofotométrico.
c) Establecer las condiciones óptimas de losparámetros probados para la aplicación del método.

* Datos Experimentales e Informe:

1. Resultados de la selección de tubos:

Tabla 1. Selección de tubos comunes para usarlos como celdas. |
Tubo Nº | %T400 (H2O) | Tubo Nº | %T400 (NiSO4) |
1 | 95.0 | 1 | 17.6 |
2 | 94.5 | 2 | 18.0 |
3 | 94.4 | 3 | 18.0 |
4 | 94.2 | 4 | 18.6 |
5 | 93.9 | 5 | 17.7 |
6 | 94.1 | 6 | 17.8 |7 | 94.5 | 7 | 17.5 |
8 | 93.2 | 8 | 17.5 |
9 | 95.2 | 9 | 17.9 |
10 | 94.7 | 10 | 17.6 |
11 | 96.0 | 11 | 16.4 |
12 | 96.9 | 12 | 16.6 |
13 | 96.5 | 13 | 16.6 |
14 | 96.6 | 14 | 16.5 |
15 | 94.5 | 15 | 17.9 |
Explique, ¿Qué son las superficies ópticas equivalentes y el diámetro interno equivalente?
Las superficies ópticas equivalentes de un conjunto de cubetas son aquellasque están libres de imperfecciones en la superficie, poseen una superficie homogénea, paredes de igual grosor, desvían la luz y producen efectos ópticos idénticos o similares. El diámetro interno equivalente se refiere a que la luz atraviese la misma distancia en todas las celdas, es decir, que el paso de luz sea el mismo en todos los tubos.

2. Curva de calibración:

Tabla 2. Curva decalibración de Fe3+ por el método del NH4SCN. |
Tubo Nº | Fe3+ (μg/mL) | A480 | A ajustada por regresión lineal |
1* | 0.000 | 0.000 | 0.005 |
2 | 0.070 | 0.009 | 0.016 |
3 | 0.174 | 0.041 | 0.032 |
4 | 0.349 | 0.062 | 0.059 |
5 | 0.698 | 0.112 | 0.113 |
6 | 1.046 | 0.163 | 0.168 |
7 | 2.441 | 0.385 | 0.384 |
8 | 3.836 | 0.592 | 0.601 |
9 | 5.231 | 0.832 | 0.817 |
10 | 6.626 |1.019 | 1.034 |
11 | 8.021 | 1.266 | 1.251 |
12 | 9.416 | 1.509 | 1.467 |
13 | 10.811 | 1.642 | 1.684 |
* Tubo usado como blanco. |


Figura 1. Curva de calibración del ión férrico por el método del NH4SCN.

a) ¿Sigue esta reacción la ley de Bouger y Beer? Explique.
Dado que el coeficiente de correlación de la curva de calibración se aproxima a uno, todos los puntos siguenuna tendencia lineal, por lo cual existe una relación de proporcionalidad entre la absorbancia y la concentración del ión férrico y por tanto se cumple con la ley de Bouger y Beer.

b) Comente acerca de la sensibilidad del método, el intervalo de concentración y escala de lectura útil del aparato.
La pendiente de la recta determina el valor de la sensibilidad del método, en este caso setiene una pendiente con un valor de 0.155, es decir, se produce un cambio de absorbancia de 0.155 por cada incremento de concentración de analito de una unidad (1 μg/mL). Acerca del intervalo de concentración, se tiene que este va de 0.070-10.811 μg/mL de ión férrico, que corresponde al intervalo donde se obedece la ley de Bouger y Beer; la escala útil de absorbancia es de 0.009-1.642.
c) Unalínea recta calculada por regresión lineal, además de utilizarse para tener la concentración de analitos de interés, se puede usar en la determinación del limite de detección de un método analítico, empleando la ecuación:
y=yB+3SB…………….(1)
Donde:
y= Señal del instrumento o medida de la absorbancia, en este caso, que produce la concentración mínima detectable.
yB = Medida de laabsorbancia del blanco que corresponde a la ordenada al origen, a, de la recta de regresión, así yB = a.
SB = Es la desviación estándar del blanco y puede hacerse igual a Sy/x, que es la desviación estándar de los residuos y, por medio de la ecuación (2).
Sy/x=i(y-yi)2(n-2)1/2…………….(2)
Se ocupan los residuos de y, (yi-yi), donde los valores de yi equivalen a los puntos sobre la recta de...