Estudio de la célula. Microscopía


TEMA 2: MÉTODOS PARA ESTUDIAR LAS CÉLULAS
1. Análisis Microscópico:

A. Conceptos básicos:
Aumento: el poder de aumento de una lente está determinado por el grado de curvatura de su superficie y la distancia focal. En las lentes convexas mientras mayor sea la curvatura, menor será la distancia focal y mayor será el aumento.
AUMENTO TOTAL: Aumento del objetivo x Aumento del ocular.Resolución: capacidad que tiene un sistema óptico de aislar dos puntos que se encuentran muy próximos entre sí, de manera que se puedan ver individualizados uno del otro.
Límite de resolución: Distancia mínima entre dos puntos para que puedan distinguirse como tales. Ej: Humano (0,23mm), M. Óptico (240nm), M. Electrónico (0,3nm). Es directamente proporcional a la longitud de onda.
Poder deresolución: Capacidad de percibir por separado dos puntos pequeños, adyacentes y cercanos. Depende de la amplitud del cono de iluminación. El PR aumenta a medida que disminuye la distancia que separa dichos puntos, es decir, el PR es inversamente proporcional al LR.

Partes del microscopio:



















Partes del microscopio:
Sistema mecánico:
Cabezal: estructura móvil queposee los oculares para ver.
Revólver: parte giratoria con diferentes lentes objetivas.
Platina: superficie para colocación de preparación.
Tornillos macrométrico y micrométrico: permiten el deplazamiento de la platina (ampliamente o milimétricamente).
Estativo: Soporte del microscopio
Sistema óptico: conjunto de lentes atravesadas por la luz
Oculares: amplían la imagen del objetivo (x4).Objetivo: amplían la imagen de la preparación (x4, x10, x40, x100).
Condensador: hace converger los haces de luz sobre la muestra.
Sistema de iluminación:
Fuente de luz.
Reostato: regula la intensidad de luz.
Diafragma: lámina que permite o impide el paso de la luz.


B. Tipos de Microscopio:



Microscopio Óptico:
Utiliza la longitud de las ondas de luz visibles (fotones). Utilizanlentes de vidrio para dirigir la imagen hacia el ojo. Existen varios tipos:
Estereomicroscopio: lupa binocular que permite visualizar muestras opacas, tridimensionales y sin ningún tipo de preparación.
Compuesto: microscopio óptico que tiene más de una lente de objetivo. Se utilizan para ver muestras transparentes. Es el más comúnmente utilizado.
Fluorescencia: ilumina el espécimen con la luz deuna onda larga especial causando que el objeto observado emita una luz con un color diferente por la absorción de fluorocromos. 
Invertido: La estructura del microscopio es invertida en comparación al microscopio convencional. La fuente de luz está ubicada por encima de la platina. Permite la mejor manipulación de la muestra, interesante por ejemplo para la fecundación in vitro.
Contraste defases: se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras de las células sin colorear. Es utilizado para la observación de cultivos celulares vivos.
Campo oscuro: utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espécimen. Las porciones claras del espécimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos minúsculos que se están analizandoaparecen como una luz brillante sobre el fondo. Es posible observar incrusiones (virus, carbón…).
Luz polarizada: Se le han añadido dos polarizadores dejando pasar únicamente la luz polarizada (luz que vibra en un único plano), que produce en el campo del microscopio claridad u oscuridad. Se utiliza para distinguir sustancias cristalinas o fibrosas (citoesqueleto, queratina, colágeno…).
Interferencial(Nomarsky): Con este instrumento es posible medir el peso seco de las estructuras celulares. Similar al de contraste de fases pero tiene mayor sensibilidad para detectar los índices de refracción, obteniendo una imagen a color.
Microscopio Electrónico:
Un cátodo emite un haz de electrones que atraviesan una estructura al vacío (para evitar la dispersación de los electrones). Por ello, no es...