"Estudio del posible efecto inductivo de cr(vi) en la peroxidaciòn lipidica de los àcidos grasos presentes en muestras de leche bovina”

C/E QA 23

Hugo Mena Carrillo, Francisco Javier Acevedo Aguilar, Pedro Luis López de Alba, Leticia López Martínez Departamento de Química, Pueblito de Rocha, Universidad de Guanajuato, CP 36040, Guanajuato, México.

“ESTUDIO DEL POSIBLE EFECTO INDUCTIVO DE Cr(VI) EN LA PEROXIDACIÒN LIPIDICA DE LOS ÀCIDOS GRASOS PRESENTES EN MUESTRAS DE LECHE BOVINA”

INTRODUCCIÓN
• Especies oxígenoreactivas (ROS) Las especies oxígeno reactivas ó ROS (HO˙, H2O2 y O2˙¯) son radicales libres, altamente reactivas y tóxicas para los seres vivos debido a su gran inestabilidad. De manera natural, el organismo cuenta con diferentes mecanismos para neutralizar las ROS. Sin embargo, cuando ocurre un desbalance entre la producción y neutralización de las ROS, se presenta un estado patológico denominadocomo estrés oxidativo. • •

METODOLOGíA
Preparación de las muestras de leche estudiadas. Se prepararon muestras de leche a distintas concentraciones de Cr(VI) (0, 100, 200 y 300 pm) para cada una de los tipos de leche usada (comercial, fresca, hervida y en polvo). En el caso de la leche en polvo se preparó una solución de leche al 10% en un solución amortiguadora de pH 6.5 de acetatos/fosfatos0.5M con capacidad tampón en la región de pH natural. Se dejaron en incubación a 40°C por 24 horas.

PARTE III: DETERMINACIÓN DE MDA POR CLAR
PROTOCOLO
Adicionar 350μl de TCA al 5% 400 μl de hexano Eliminar el hexano Adicionar 50μl de 2,4 DNFH 3.5 mM en HCl 2M

Tomar 500 μl de muestra Extraer con 400μl de hexano (3 veces) 30 minutos en a temperatura ambiente

Efectos de las ROS enbiomoléculas Las ROS pueden reaccionar con lípidos, proteínas, ácidos nucleicos y carbohidratos con el riesgo de alterar su estructura y en consecuencia sus funciones específicas. • Mecanismo de degradación de los lípidos por efecto de las ROS
Ácido graso insaturado - H˙ Abstracción de un átomo de H por una ROS

Evaporar el hexano recolectado bajo corriente de N2

Disolver residuos con 500μl de MeCNSe introducen 20l de muestra al CLAR

RESULTADOS Y DISCUSIÒN
PARTE I: ANÁLISIS DE LOS ÁCIDOS GRASOS POR GC-FID
PROTOCOLO
Adicionar 500μl de CHCl3

RESULTADOS Resultados obtenidos para la determinación de MDA en las muestras de leche empleadas en este estudio que contenían diferentes concentraciones de Cr(VI). MDA, g/ml Cr, ppm 0 100 Leche Fresca 0.17 0.09 0.10 0.11 Leche Hervida 0.080.10 0.13 0.18 Leche
Pasteurizada

Leche en Polvo 0.30 0.23 0.15 0.11

C·

0.21 0.92 0.10 0.15

Reordenamiento molecular

C·

Centrifugar 5 minutos a 3,000 g Tomar 100μl de muestra

Extraer la fase orgánica

200 300

O

O·
Añadir 700μl de isooctano y 100 μl de estándar interno

Absorbancia, mUA

En condiciones aeróbias, se adiciona una molécula de O2

Generación unradical peroxil

Dejar en reposo por 5 minutos

Agitar y centrifugar 5 minutos a 3,000 g

Adicionar Na2SO4 y 100μl de KOH al 2% en MeOH

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0 ppm de Cr(VI) 100 ppm de Cr(VI)

18

200 ppm de Cr(VI) 300 ppm de Cr(VI)

H˙ El radical peroxil puede abstraer un átomo de H de una molécula de ácido graso vecina

Introducir 1l de muestra al GC-FID para su análisis

14

Se observa laformación de un biomarcador del estres oxidativo (MDA) por efecto de la presencia de Cr(VI) en la muestra.

10 360 380 400 Tiempo, s Á. oleico 420 440

RESULTADOS
Á. palmitoléico

O

OH

500 400 Voltaje, mV

Este proceso puede continuar en forma de una reacción en cadena.

Voltaje, mV

Á. elaícico

30 20 10

Á. linoléico

O

O

H H H H H

40

Cromatogramas típicosobtenidos en el análisis por CLAR de las muestras de leche pasteurizada conteniendo diferentes concentraciones de Cr(VI).

300 200 100 0

H

CONCLUSIONES
En los resultados obtenidos en el análisis de las muestras de leche pasteurizada por GC-FID se puede observar, que la presencia de Cr(VI) es capaz de provocar la peroxidación lipídica de los ácidos grasos: palmitoléico, elaídico, oleico y...