Evaluacion de agentes antimicrobianos

Laboratorio de Microbiología




Informe correspondiente a la actividad practica “Agentes Químicos”







Introducción:

Existen diferentes sustancias químicas que son capaces de afectar el desarrollo de las bacterias mediante muchos mecanismos distintos. Estas sustancias por lo generar actúan bloqueando procesos o moléculas indispensables para la vida de las células, como porejemplo la reproducción, síntesis proteica, síntesis de ADN o precipitación de proteínas fundamentales. También hay sustancias que actúan sobre la pared celular de las bacterias, siendo esta característica muy utilizada en antibióticos para uso humano o animal. Permite por ejemplo eliminar o mitigar una infección con un daño mínimo al organismo infectado, ya que las células animales no poseenmembrana celular.

Los agentes químicos también se utilizan como herramienta de desinfección domestica, uno de los más populares es el hipoclorito de sodio. Su capacidad de eliminación de microorganismos así como su espectro son un poco limitados, pero es muy conocido y muy utilizado. El hipoclorito de sodio es ampliamente utilizado como producto de limpieza por sus capacidades de desinfección. Ensolución acuosa este compuesto tiene la capacidad de formar sales con ácidos grasos, e incluso libera cloro, lo cual forma cloroaminas en contacto con proteínas llevando a la degradación proteica. Este es un ejemplo de cómo un agente químico puede intervenir desestabilizando el equilibrio dentro de las células (1).

Los efectos de los agentes químicos pueden dividirse según su efecto. Existenagentes bactericidas, los cuales tras su aplicación en la concentración adecuada dan como resultado una pérdida de la viabilidad bacteriana. Esto se puede comprobar realizando una siembra de la muestra tratada en un medio adecuado, en el cual no se debería observar crecimiento. También existen agentes con efecto bacteriostático, lo cual se traduce en una disminución(o detención) de la tasa decrecimiento de las bacterias en una muestra. Estos agentes impiden que las bacterias se multipliquen pero no genera una pérdida de viabilidad, es decir, si definimos la muerte celular como perdida de viabilidad en este caso el agente no las “mata”.

En este trabajo se realizo un seguimiento del crecimiento bacteriano en una muestra sin agente, y con dos concentraciones diferentes de Etanol.
A lolargo del proceso se midió la densidad óptica de la muestra, lo cual se relaciona mediante su nivel de absorbancia a 600nm con la cantidad de bacterias presentes a cada momento en la muestra. Este ensayo nos permite estimar el número total de bacterias, pero también las bacterias muertas aportan a la turbidez de la muestra, por lo que a tiempos determinados se tomaron muestras las cuales se sembraronpara monitorear la viabilidad.

Objetivos:
Determinar la curva de crecimiento de un m.o y del efecto de los agentes químicos en el crecimiento microbiano.
Evaluar la eficiencia de agentes químicos comerciales y antibióticos en el crecimiento microbiano.


Resultados:
El agente químico que se utilizo para este ensayo fue el Etanol, en una concentración del 95%.
Se utilizaron tresmuestras. La muestra A fue solamente inoculada con microorganismos. Las muestras B y C contenían el mismo inoculo que la muestra A, con 10uL de etanol en la muestra B y 20uL en la muestra C.
A continuación se muestra la tabla con los datos de absorbancia a 600nm y los tiempos a los que fue registrada.
Muestra A
Muestra B
Muestra C
tiempo (min)
0.28
0.2
0.3
5
0.35
0.36
0.36
30
0.45
0.480.47
45
0.77
0.62
0.66
100
0.91
0.68
0.74
140






Con los datos de la tabla se genero la curva de crecimiento que se muestra a continuación, en donde se puede observar la absorbancia en función del tiempo para cada muestra.

Con los datos del grafico se calcula el tiempo de generación estimado, que es el tiempo entre dos puntos donde la absorbancia se duplica.
La ecuación del...