Evolución De Vertebrados

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Ensayo de toxicidad aguda con
bulbos de cebolla A llium cepa L
m ediante la evaluación de
l a inhibición del crecimiento
p romedio de raíces
María Consuelo Díaz Báez, Alicia Ronco
y Yolanda Pica Granados

C lasifiCaCión

d el e nsayo :

iC

Principio de la prueba
Cuando un bulbo de cebolla (Allium sp.) se rehidrata se produce una estimulación del crecimiento de las células,lo cual permite la elongación de las raíces
de la planta. Sin embargo, cuando la hidratación se lleva a cabo en presencia
de sustancias tóxicas, la división celular de los meristemos radiculares puede
inhibirse, ya sea retardando el proceso de mitosis o destruyendo las células.
Este tipo de alteraciones generalmente impide el crecimiento normal de la
raíz, y por tanto su elongación (Fiskesjö1985, 1993, 1997).

Este ensayo apareció publicado originalmente en G. Castillo (ed.). 2004. Ensayos toxicológicos y métodos
de evaluación de calidad de aguas. Estandarización, intercalibración, resultados y aplicaciones. IDRC,
IMTA, Canadá. 202 pp. Se reproduce con la autorización de la editorial.

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Intercalibrados

Ensayos de toxicidad aguda con bulbos de cebolla

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Ensayospara agua dulce

El efecto puede determinarse en forma indirecta, mediante la comparación de
la elongación de las raíces de cebollas expuestas al compuesto tóxico contra la de
cebollas no expuestas, luego de un período de 72 horas de prueba. La cuantificación del efecto se realiza estableciendo el porcentaje de inhibición del crecimiento
de las raíces respecto a la longitud promedio de lasraíces del control.

M aterial
Tubos de ensayo de vidrio de 10 cm de largo y 1.5 cm de diámetro (o recipientes
de mayor tamaño, dependiendo del tipo de bulbos a utilizar), gradillas o so-

portes para tubos, bisturí y reglilla para hacer mediciones en cm o mm.

R eactivos y soluciones
Medio de crecimiento
El medio de crecimiento que se utiliza en el desarrollo del ensayo se prepara
deacuerdo con lo que se indica en la tabla 2.1.
Tabla 2.1. Medio de crecimiento para Allium sp.
Masa de sal para disolver en un litro de agua destilada
Reactivo
Cantidad (mg)
Ca(NO3)2•4H2O
KNO3
MgSO4•7H2O
KH2PO4
Fe EDTA•3H2O
Reactivo
MnSO4
CuCl2
NaMnO4
ZnSO4
H3BO3

236.1
202
246
136.1
67.6
Elementos traza

Cantidad (mg)
0.55*
0.0645*
0.001*
0.0007*
0.23*

* Los componentescorrespondientes a elementos traza deben ser
adicionados a partir de una solución stock.

Ensayos de toxicidad aguda con bulbos de cebolla

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La solución madre, preparada de acuerdo con lo indicado, se diluye 10 veces
con agua destilada, y el pH se ajusta a 7.0 antes de utilizarla. También se puede
utilizar agua dura o agua de la llave como medio de crecimiento. En el caso de usarcualquiera de estas opciones, el control negativo y el agua utilizada para preparar
las diluciones de los compuestos o las muestras deberán ser los mismos.

Organismos de prueba
Para la elaboración de las pruebas se deben seleccionar bulbos de Allium sp.
(cebolla amarilla) de 1.5 cm de diámetro, secos y sin formación de hojas o
raíz. Éstos pueden ser obtenidos del mercado local o adquiridos através de
algún proveedor.
Previo al montaje de la prueba, los bulbos deben limpiarse eliminando la
epidermis seca y removiendo, con un bisturí o instrumento punzante, los restos de tejido y raíces del área radicular (figura 2.1 (1)). No se deben dañar las
raíces primordiales. Con el fin de eliminar los restos de tejido, es conveniente
colocar los bulbos en agua destilada por 2 horas y dejarsecar.
Almacenamiento de los bulbos de cebolla
Se recomienda adquirir los bulbos en vísperas de la realización de pruebas o,
en su defecto, almacenarlos en un lugar donde se puedan garantizar condiciones secas y una temperatura entre 10 y 20 °C. En algunas regiones, los bulbos
pueden mantenerse almacenados hasta por un año; sin embargo, en zonas
geográficas donde la temperatura y la humedad...