Exclusion Molecular

Objetivos:
Determinar el peso molecular de una proteína problema por interpolación de su volumen de elusión.
Realizar una gráfica donde relacione los volúmenes de elusión relativos y el logaritmo delos pesos moleculares de las proteínas patrón.
Utilizar el gel apropiado para eluir proteínas de peso molecular conocido y determinar el volumen de elusión delas mismas.
Fundamento:
Lacromatografía de exclusión molecular(a menudo también llamada filtración en gel o tamiz molecular) es una de las técnicas más sencillas de las empleadas en la separación de proteínas y ácidos nucleicos. Este tipode cromatografía se realiza en columnas cilíndricas rellenas con algunos geles que se fabrican con este fin y que puede ser de varios tipos. Todos estos geles se hallan constituidos por gránulos deun material esponjoso hidratado, que contiene poros con un tamaño de diámetro determinado. Cuando se hace pasar una mezcla de moléculas de distinto tamaño, a través de una columna de filtración en gel;aquellas moléculas con un tamaño mayor al diámetro de los poros de las partícula, solo podrán moverse en su camino, a través de la fase estacionaria, en el espacio que queda entre las partículas; ypor lo tanto, no se verán retrasadas en su descenso. En cambio aquellas moléculas capaces de penetrar en las partículas se verán retrasadas por la fase estacionaria; en mayor medida, cuanto menor seasu tamaño. Por lo tanto, las moléculas eluyen en ese tipo de cromatografía por oren decreciente de tamaño molecular.









Resultados:
Tabla #1 donde se muestran los datos para el perfil de elusiónpara el colorante azul dextrana 2000.
# de fracción
Volumen de elución (mL)
A615
1
3
0
2
6
0.002
3
9
0.013
4
12
0.004
5
15
0.039
6
18
0.817
7
21
0.600
8
24
0.109
9
27
0.027
10
30
0.016

Grafica #1perfil de elución de la dextrana azul 2000 donde se muestra el volumen vacío que en este caso es de 18.





Tabla #2 Determinación del volumen de elución.
Volumen de elución
Absorbancia

Proteína 1...