Expo Biomoleculas

Reactivos y métodos
utilizados para la
identificación de
proteínas en la
estructura primaria

El
conocimiento
de
la
secuencia
a-a
de
una
proteína es esencial para
una comprensión de su
mecanismomolecular de
acción, así como es el
requisito previo para el
establecimiento
de
su
estructura por rayos X.

Frederick Sanger
et al.

Esto revelo que las
proteínas tienen una
subestructura
definible queno es
regular, ni repetitiva
a diferencia de los
polisacáridos

Primeros en identificar
la sec. De a-a en una
proteína. ( 1950)

La insulina bovina se
eligió para el estudio por
su disponibilidad ytamaño
pequeño: dos cadenas
polipeptidicas de 21 y 30
a-a

Para la determinación de la estructura primaria, el
procedimiento está constituido por tres partes:

Preparación de la proteína para lasecuenciación

Secuenciado de las cadenas polipeptidicas

Organización de la estructura completa

Preparación
de la
proteína
para la
secuenciaci
ón

Determinar el no. De
cadenas
polipeptidicas
diferentesSe(subunidades)
rompen los enlaces
existentes
en
la
disulfuro
de la proteína
proteína

Separación
purificación de
subunidades

y
las

Determinación de la
composición de a-a
de las subunidadesSecuenciado
de las
cadenas
polipeptidica
s

Fragmentar las subunidades
individuales en puntos
específicos a fin de obtener
péptidos pequeños que
puedan secuenciarse
directamente

Separar y purificar losfragmentos

Determinar la secuencia
de a-a de cada fragmento
peptídico

Organizació
n de la
estructura
completa

Situar los puntos de ruptura
de
un
conjunto
de
fragmentos de péptidos por
comparación conlos otros.
Por
comparación
las
secuencias
de
estos
conjuntos pueden disponerse
en el orden en el que se
hallan en la subunidad y por
ello
se establece su
secuencia de a-a

Aclarar la s posiciones delos enlaces disulfuro , si es
que hay ent5re las
subunidades o en el
interior de las mismas.

IDENTIFICACIÓN DEL RESTO NTERMINAL

Cada cadena polipeptidica
posee un resto N- terminal
y un resto C-...