Expresión heteróloga de Glutatión-S-Transferasa (GST) de Schistosoma japonicum en E.coli BL21


•Expresión heteróloga de Glutatión-S-Transferasa (GST) de Schistosoma japonicum en E.coli BL21

Jaitza Camacho, Steven García, Stephanie López, Kiomaris Nieves, Vimaliz Resto, Dennes Rodríguez y Josean Rosado
Universidad de Puerto Rico en Arecibo, Departamento de Biología

Resumen:
El estudio de la biología a nivel molecular es un campo que solapa área de la biología y química tales como la genética ybioquímica. Esta comprende las interacciones entre los diferentes sistemas de una célula, incluyendo interacciones entre el ADN, RNA y síntesis proteica. La biología molecular emplea varias técnicas entre ellas una de las más frecuentes es la expresión heteróloga de proteínas en sistemas de expresión. Durante esta investigación se trabajará en la expresión de la proteína GST en células de E.coli BL21 por medio de varias pruebas moleculares. Algunas de estas son: métodos de Bradford, SDS- PAGE, Western- blot, cultivos celulares entre otras. Los resultados contundentes de cada uno de estos ensayos nos revelarán si el objetivo del proyecto se ha logrado exitosamente. Además, llevar a cabo cada uno de los laboratorios será de provecho para el estudiante dominar nuevas técnicas que están ala vanguardia en el siglo XXI.
Palabras claves: GST, expresión heteróloga, técnicas moleculares
Introducción:
La expresión genética, es de gran utilidad en la biología molecular. Por medio de esta, el ser humano logra un sinfín de aplicaciones, las cuales sirven de base para diversos tratamientos o producción de fármacos entre otras cosas. Especialmente, la expresión heteróloga de proteínas ensistema de expresión es de suma importancia en la biología molecular. Estos sistemas de expresión permiten la introducción de genes de diversas especies en una célula anfitriona en el cual pueda transcribir y traducir el mismo para así sintetizar un producto de interés.
Por otro lado, las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas a una mayor velocidad. Unejemplo de esta es la Glutatión-S-Transferasa, también conocida como GST, esta tiene como función aceptar sustratos endógenos y xenobióticos. A su vez la GST, cataliza el ataque al nucleófilo del sustrato fisiológico GSH¹ sobre el centro electrófilo de un gran número de estructuras tóxicas. Ésta enzima se puede encontrar tanto en células eucariotas como en procariotas. Además, laGlutatión-S-Transferasa es importante para el desarrollo de nuevos antibióticos.
Por consiguiente, se utilizaron una serie de métodos los cuales facilitaron la investigación que se llevó a cabo con la GST. Entre los métodos utilizados está el SDS PAGE, el cual consiste en separar las proteínas de acuerdo a su movilidad electroforética. Por otra parte, utilizamos la técnica de cromatografía por afinidad, la cual permitela separación de mezclas proteicas por su afinidad y capacidad de unión. De la misma manera se utilizó el método de espectrofotometría, el cual consiste en el análisis óptico de una sustancia. Finalmente esta la técnica de Inmuno-Blotting, también conocida como Western Blot, esta técnica permite detectar proteínas específicas en una muestra determinada. El objetivo principal de este trabajo esevidenciar por medio de los distintos análisis que se llevaron a cabo la expresión heteróloga de esta proteína en un sistema de expresión. La célula anfitriona lo es E. coli BL21 (DE3).
Materiales y métodos
Transformación de células competentes E. coli BL21 (DE3) con plásmido pGEX-6p-2
Procedimiento:
Se marcan dos microtubos (‘positivo’ (+DNA) y el segundo tubo como ‘negativo’ (-DNA) y se...