Exraccion de adn

EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE MUESTRAS DE SANGRE

PINEDA HERNANDEZ FABIO ENRIQUE

ALVEIRO PEREZ, GENETICA MOLECULAR

RESUMEN

En el presente laboratorio se llevó a cabo la extracción de DNA a partir de células sanguíneas. Para dicho proceso en la muestra de sangre se procedió a lisar los eritrocitos con choque hipotónico y en presencia de detergentes para eliminar el exceso dehemoglobina. Subsiguientemente se sometieron los leucocitos a un baño de María en lugar de proteinasa K, la cual habitualmente es empleada en los laboratorios para remover las proteínas que lleva unidas el DNA. Posteriormente Las proteínas parcialmente degradadas se eliminaron de la disolución mediante una precipitación salina y el DNA fue recuperado por medio de precipitación con etanol.

INTRODUCCIONEl DNA es la molécula esencial de todos los sistemas de organización biológica. La publicación del genoma humano ha abierto muchas puertas para las investigaciones en el campo de la genética molecular, muchas de las técnicas empleadas en este creciente campo incluyen algún tipo de manipulación del material genético. Estos procedimientos han logrado adelantar hasta tal grado el conocimiento delcódigo genético. Los procedimientos iniciales eran largos y tediosos y podían pasar varios días antes de saber con certeza que se había logrado obtener DNA en calidad y cantidad suficiente para poder manipularlo. Hoy día podemos obtener suficiente DNA de buena calidad en un tiempo mucho más reducido empleando los diferentes métodos existentes en la actualidad, los cuales, en sentido general tienencomo punto de partida la destrucción y lisis de las células. Con este fin, se incuba la suspensión celular con detergentes y/o enzimas líticas. El paso siguiente es disociar el ADN de las proteínas que llevan unidas. La mayoría de los protocolos utilizan una enzima proteolítica fuerte como la proteinasa K. Seguidamente se realiza la extracción del material genético empleando altas concentraciones desales, extracción orgánica o promoviendo la unión del DNA a una fase sólida, como ocurre en la técnica que emplea una columna de sílica gel o por medio de intercambio iónico.

Habitualmente el DNA es recuperado llevando a cabo una precipitación con alcohol (etanol o isopropanol). El DNA extraído de esta forma es apto para la mayoría de las técnicas de análisis en genética molecular. A parte deeste método existen numerosas variantes metodológicas para purificar el DNA dependiendo del tipo de material de partida (sangre, tejidos, bacterias, levaduras) basados en solubilidad o precipitación diferencial de DNA o basado en su afinidad a distintos tipos de matrices. Normalmente el DNA se extrae a partir de muestras que contienen células nucleadas, ya que en el núcleo es donde está el DNAgenómico.

En el presente laboratorio se lleva a cabo la extracción del material genético a partir de células sanguíneas empleando los reactivos necesarios para dicho objetivo con el fin de familiarizarse con la técnica de extracción de DNA, la cual fue diseñada de manera adecuada para obtener DNA de buena calidad y en una cantidad considerable para un adecuado análisis en laboratorios de genéticamolecular.

OBJETIVOS

GENERALES

• Comprender el papel que juegan cada una de las soluciones y compuestos químicos utilizados en el proceso de extracción de ácidos nucleicos a partir de muestras de sangre periférica.

ESPECÍFICOS

• Conocer los fundamentos de la técnica de extracción de ADN utilizando altas concentraciones de sales a partir de células sanguíneas (eritrocitos).

•Realizar destrucción y lisis de los eritrocitos con el buffer de lisis de células rojas.

• Precipitar las proteínas y los contaminantes usando altas concentraciones de NaCl 6M.

• Remover el precipitado por técnicas de centrifugación.

• Recuperar el ADN utilizando etanol absoluto frío.

MATERIALES Y MÉTODOS

La extracción de ADN se realizó a partir de una muestra de sangre humana...