extarccion de DNA
Páginas: 4 (955 palabras)
Publicado: 15 de abril de 2014
EXTRACCIÓN MANUAL DE ADN A PARTIR DE SANGRE TOTAL
EN EDTA UTILIZANDO EL KIT DE PURIFICACIÓN DE GENTRA
1. Abreviaturas utilizadas.
•
ADN: ácido desoxiribonucleico.
•
EDTA: ácidoetilendiaminotetraacético.
•
PBS (Na+/K+): Phosphate Buffered Saline (sodio/potasio).
•
g: medida de fuerza de centrifugación.
•
ml: mililitro.
•
min: minutos
•
s: segundos
•nm: nanómetros
•
Pellet: cúmulo compacto de células y/o restos celulares que se producen en el
fondo de un tubo después de una centrifugación o decantación.
•
T.A.: temperatura ambiente(18-25ºC).
2. Materiales.
•
DNA purification system Puregene™, de Gentra Systems (Minneapolis, MN),
compuesto de los siguientes reactivos:
- RBC Lysis Solution.
- Cell lysis Solution.
-RNase A Solution.
- Protein Precipitation Solution.
- DNA Hydration Solution.
•
Isopropanol (2-propanol) al 100%.
•
Etanol al 70%.
•
Tubos cónicos de 50 ml, tipo Falcon.
•
Tubosde 5 ml y 10 ml transparentes, con tapón.
•
Puntas de micropipeta de 200 µl.
•
Pipetas Serológicas de 10 ml, para pipeteador eléctrico.
3. Desarrollo.
3.1. Operaciones previas.
•Encender un baño termostatizado de agua a una temperatura de 37ºC.
Centro de Investigación del Cáncer. Universidad de Salamanca. Campus Miguel de Unamuno, s/n. 37007 Salamanca.
Tlf.: 923 294 833.Fax: 923 294 795. e-mail: bancoadn@usal.es
•
Añadir 50 µl de RNase A Solution a 10 ml de Cell Lysis Solution y mezclar bien.
Nota: La RNase A Solution mezclada con Cell Lysis Solution esestable durante al menos 8 semanas
a temperatura ambiente.
3.2. Lisis celular.
•
Añadir 8-10 ml de sangre a un tubo Falcon de 50 ml que contenga 30 ml de
RBC Lysis Solution. Invertir el tubo paramezclar e incubar a T.A durante 5
min. o el tiempo que sea necesario para que se rompan los glóbulos rojos.
Estos estarán lisados cuando el color de la mezcla sea muy oscura; invertir al
menos...
EN EDTA UTILIZANDO EL KIT DE PURIFICACIÓN DE GENTRA
1. Abreviaturas utilizadas.
•
ADN: ácido desoxiribonucleico.
•
EDTA: ácidoetilendiaminotetraacético.
•
PBS (Na+/K+): Phosphate Buffered Saline (sodio/potasio).
•
g: medida de fuerza de centrifugación.
•
ml: mililitro.
•
min: minutos
•
s: segundos
•nm: nanómetros
•
Pellet: cúmulo compacto de células y/o restos celulares que se producen en el
fondo de un tubo después de una centrifugación o decantación.
•
T.A.: temperatura ambiente(18-25ºC).
2. Materiales.
•
DNA purification system Puregene™, de Gentra Systems (Minneapolis, MN),
compuesto de los siguientes reactivos:
- RBC Lysis Solution.
- Cell lysis Solution.
-RNase A Solution.
- Protein Precipitation Solution.
- DNA Hydration Solution.
•
Isopropanol (2-propanol) al 100%.
•
Etanol al 70%.
•
Tubos cónicos de 50 ml, tipo Falcon.
•
Tubosde 5 ml y 10 ml transparentes, con tapón.
•
Puntas de micropipeta de 200 µl.
•
Pipetas Serológicas de 10 ml, para pipeteador eléctrico.
3. Desarrollo.
3.1. Operaciones previas.
•Encender un baño termostatizado de agua a una temperatura de 37ºC.
Centro de Investigación del Cáncer. Universidad de Salamanca. Campus Miguel de Unamuno, s/n. 37007 Salamanca.
Tlf.: 923 294 833.Fax: 923 294 795. e-mail: bancoadn@usal.es
•
Añadir 50 µl de RNase A Solution a 10 ml de Cell Lysis Solution y mezclar bien.
Nota: La RNase A Solution mezclada con Cell Lysis Solution esestable durante al menos 8 semanas
a temperatura ambiente.
3.2. Lisis celular.
•
Añadir 8-10 ml de sangre a un tubo Falcon de 50 ml que contenga 30 ml de
RBC Lysis Solution. Invertir el tubo paramezclar e incubar a T.A durante 5
min. o el tiempo que sea necesario para que se rompan los glóbulos rojos.
Estos estarán lisados cuando el color de la mezcla sea muy oscura; invertir al
menos...
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