Extracción De Adn Genómico

PRÁCTICA No. 1
EXTRACCIÓN DE ADN GENÓMICO
INTRODUCCIÓN
El ácido desoxiribonucleico o ADN (DNA) es la molécula que guarda el código genético de todas las células. Sin importar que el organismo sea multicelular o unicelular, eucariota o procariota, todos tienen el DNA como vehículo de su código genético.Muchas de las técnicas de biología molecular incluyen algún tipo de manipulación del material genético. Estos procedimientos han logrado adelantar hasta tal grado el conocimiento del código genético, que ya es posible clonar organismos enteros. Los procedimientos iniciales eran largos y tediosos y podían pasar varios días antes de saber con certeza que se había logrado obtenerDNA en calidad y cantidad suficiente para poder manipularlo. Además algunos de los reactivos usados para estos procesos son tóxicos y mutagénicos. Hoy día podemos obtener suficiente DNA de buena calidad en unas horas.
La extracción del ADN es el primer paso para el posterior análisis de este, existen muchos métodos para la extracción de ADN de acuerdo al tipo celular que lo posea, ya seanplantas, animales o bacterias. Medios mecánicos como el vortex y la centrifugación son indispensables para procesos como precipitación del ADN y lisis celular. Para limpiar la solución resultante se utilizan reactivos detergentes y sufractantes que debido a su conformación interaccionan con los componentes membranales y las soluciones, lo que permite al final del protocolo obtener un ADN de calidad paraprocesos posteriores como la Reacción en Cadena de la Polimerasa, PCR.


FUNDAMENTO
El proceso general de aislamiento de ADN involucra 3 pasos; primero, la lisis de membranas celulares, mediante el uso de buffer específicos y altas temperaturas. Segundo, la degradación de las proteínas por incubación con proteinasa K y/o sales saturadas. Tercero, la extracción de ADN y su precipitaciónmediante el uso de alcoholes.
Una centrífuga puede girar a velocidades de hasta 15.000 rpm y facilita la separación de las diferentes fases de la extracción. También se utiliza para precipitar el ADN después de las sales se lavan con etanol o isopropanol.

OBJETIVO
Extraer ADN genómico de moscas.

DISCUSIÓN
El desarrollo de los métodos moleculares ha llevado a la necesidad de crear métodos deextracción de ADN más simples y eficientes, sin embargo, variaciones en la eficiencia de la lisis, el rendimiento y la pureza del ADN pueden afectar los resultados de técnicas moleculares como la RCP, la hibridización y el clonaje.
Existe un elevado número de protocolos para la extraccción de ADN que presentan diferencias dependiendo del tipo de organismo, del tejido de partida o de la calidadfinal deseada del ADN.
La metodología clásica consiste en una primera homogenización mecánica del tejido en un tampón de extracción. Este tampón está generalmente compuesto por Tris, que proporciona las propiedades tamponadoras, un quelante (EDTA) para inhibir la acción de ADNsas, una sal (normalmente cloruro sódico) y un detergente que faciliten la ruptura de las membranas celulares y nucleares. ElADN puede separarse de las proteínas y restos celulares mediante precipitación de las proteínas facilitada por la presencia de dodecil sulfato sódico (SDS) y acetato potásico (el ADN permanece en suspensión tras la precipitación por centrifugación), o alternativamente, utilizando cloroformo para separar las proteínas de la fase acuosa, donde permanece el ADN. La extracción con cloroformo permiteobtener un ADN más puro y menos sensible a degradación, aunque tiene el inconveniente del manejo de disolventes orgánicos.
El ADN en disolución puede ser concentrado y purificado por precipitación con etanol o isopropanol para posteriormente resuspenderse en un volumen apropiado de tampón TE o agua.
Al homogeneizar el material se liberan fenoles que se oxidan rápidamente y pueden provocar la...