extracción de ADN vegetal

Unidad Educativa Bilingüe Nuevo Mundo
Biología Nivel Medio
Estudiante: Cristel Riofrío.
Docente: Ruth Carrera.
Curso: II Bach Iónic.
Fecha: Martes 27 de noviembre de 2012.
Práctica #2

Tema: Extracción de ADN de un tejido vegetal.

Planteamiento del problema: ¿Qué efecto tienen las diferentes temperaturas (15˚C y 28˚C) en la cantidad de ADN extraída de una muestra de cebolla de 3.23g después de24 horas?

Hipótesis: El ADN de la muestra de tejido de cebolla se deteriorará y de desintegrará después de haber sido congelado durante 24 horas a 15 ºC mientras que la muestra de tejido de cebolla que no ha sido congelada presentará ADN no deteriorado ni desintegrado.

Objetivo: Realizar la extracción de ADN de una muestra de un tejido de cebolla a temperatura ambiente (28ºC) y una muestra de untejido de cebolla que ha estado en congelamiento durante 24 horas a 15ºC para determinar si existe presencia de ADN en un tejido que se ha sido previamente congelado.

Variables:
Independiente: Temperatura ambiente (28ºC), congelamiento (15ºC)
Dependiente: Presencia de ADN
Controlada: Peso de la muestra (3.23g)

Método de control de variables:
-Se utilizará una balanza eléctrica ± 0.01 g,la cual deberá ser encerada antes y después de pesar cualquier instrumento o sustancia.
-De una cebolla se cortará dos muestras de tejido, la cebolla debe ser fresca y cada muestra pesará lo mismo, 3.23 ± 0.1g en cada ensayo.
-La presencia de ADN será observable después de haber expuesto la muestra de tejido de cebolla a la solución buffer a cual será preparada más adelante.
-Una de las muestrasde tejido de cebolla será congelado en cada ensayo, para se utilizará la refrigeradora a una temperatura de 15 ºC.
-Las muestras serán congeladas durante 24 horas, el tiempo será medido con un cronómetro ± 0.02 min.

Materiales:
1 Agitador de vidrio
1 Probeta 100 ± 0.05 mL
1 Probeta 50 ± 0.01 mL
1 Cuchillo
1 Par de guantes
1 Vaso de precipitación 80 mL
1 Vaso de precipitación 200 mL
1 Vidrioreloj
1 Balanza eléctrica ± 0.01g
1 Gasa
1 Embudo con vástago largo y delgado
1 Cronómetro ± 0.02 min
1 Nevera ± 1 ºC
1 Regla 30 ± 0.01 cm

Sustancias:
610 ± 0.05 mL de Agua
1.5 ± 0.05 g de Sal de mesa
5 ± 0.05 g de Bicarbonato de Sodio
5 ± 0.05mL de Jabón líquido
10 ± 0.05 mL Alcohol Isoprópilico
32.3 ± 0.20 g de cebolla

Metodología experimental de recolección de datos:
1.- Encender la balanzaeléctrica.
2.-Pesar 1.5 g de sal de mesa en la balanza electrónica.
3.- Medir 120 ml de agua en una probeta 200mL.
4.-Pesar 5 g de Bicarbonato de sodio en la balanza eléctrica.
5.-Medir 5 mL de jabón líquido en una probeta 10 mL.
6.-Preparar la solución buffer
a) Mezclar 1.5 g de Sal de mesa, 120 mL de agua, 5 g de Bicarbonato de sodio y 5 mL de jabón líquido en un vaso de precipitación de 200mL.
b) Agitar la solución para que sus elementos se disuelvan completamente.
8.-Medir 10 mL de la solución buffer y verter en un tubo de ensayo.
9.- Congelar la solución buffer durante24 horas a una temperatura de 15 ºC.
10.-Medir 10 mL de alcohol Isopropílico en una probeta 10 mL y verter en un tubo de ensayo.
11.- Congelar el alcohol durante 24 horas a una temperatura de 15 ºC.12.-Cortar la cebolla.
13.-Pesar 3.23 g en la balanza eléctrica.
14.- Medir 2 mL de agua en una probeta 10 mL.
15.-Macerar la muestra de cebolla con 2 mL de agua.
16.-Mezclar el macerado con los 10 mL de la solución buffer congelada con anticipación.
17.-Filtrar la mezcla en una gasa.
18.- Verter la mezcla filtrada en un tubo de ensayo rotulado con la letra “A”.
19.-Verter los 10 mL dealcohol Isopropílico en el tubo de ensayo “A”.
20.-Esperar durante 30 min para medir el ADN con una regla.
21.- Lavar los instrumentos, secarlos y ubicarlos en su puesto inicial.
22.- Repetir los pasos del 12 al 21.


Tabla #1
Cantidad de ADN obtenido en cada muestra de tejido de cebolla en las dos condiciones

Muestra
Cantidad de ADN en la muestra de tejido de cebolla a temperatura ambiente...