Extracción de ADN y estudio de algunas de sus propiedades.

Resumen
Se realizó una práctica de extracción y estudio de propiedades de ADN a partir de levadura por un método consistente en cuatro pasos; el rompimiento celular mediante arena y la extracción inicial del ADN se le adicionó SDS y EDTA. La desnaturalización de las proteínas se llevó a cabo con una solución de cloroformo-alcohol isoamílico y posterior centrifugación a 5000 rpm. Laextracción final del ADN se obtuvo por precipitación con etanol. Y se procedió a determinar la cantidad de ADN extraído y de su pureza.
Palabras claves: levadura, ADN, extracción, desproteinización, SDS, EDTA.




Introducción

Ácidos nucleicos son macromoléculas compuestas por nucleótidos, que tienen en su estructura un azúcar (ribosa o desoxirribosa), una base nitrogenada (adenina,guanina, citosina, timina, uracilo) y un grupo fosfato.

Según el azúcar que forma su esqueleto se distinguen dos tipos de ácidos nucleicos: el ADN, con desoxirribosa y el ARN, con ribosa. El ADN contiene la información genética necesaria para la síntesis de las proteínas que forman los seres vivos y llevan a cabo todos los procesos fisiológicos de los seres vivos. El ARN tiene diversas funcionessiendo una de las principales el transporte de la información desde el ADN hasta la maquinaria donde se producen las proteínas. A nivel estructural encontramos que mientras el ADN se encuentra mayoritariamente formado por una doble hélice con dos hebras complementarias, el ARN está formado por moléculas de una sola hebra que se pliegan sobre sí mismas adquiriendo estructuras internas.1

En suestructura secundaria, y de acuerdo a los diversos estudios fisicoquímicos, el ADN en solución acuosa ha demostrado que se trata de un polímero de elevado peso molecular (5 x 106) y que ofrece una configuración más bien rígida y distendida. Entre las consecuencias de su elevado peso molecular y de la rigidez de sus moléculas se destaca la elevada viscosidad de las soluciones acuosas de ADN. Unasolución de ADN tiene una densidad mucho mayor que la del agua. Otra consecuencia de las citadas propiedades de la molécula de ADN es la gran facilidad con que las fuerzas de fricción reducen su peso molecular por rotura de su cadena.

En el presente informe se muestra un método de extracción del ADN de levadura en cuatro fases:
1) Ruptura de las células de levadura, mediante un método mecánico.2)Homogeneización del extracto en presencia de detergente y EDTA.
3) Desnaturalización de las proteínas ligadas al ADN con cloroformo y alcohol isoamílico.
4) Precipitación del ADN con etanol.

Objetivos

Aislar y estudiar los efectos del pH y de cambios brusco de temperatura en el ADN.
Determinar la cantidad de ADN extraido.
Determinar la pureza del ADN mediante la relación delabsorbancia a 260 nm y 280 nm.

Marco teórico

DESNATURALIZACIÓN DEL ADN 2
Un comportamiento característico observado en las disoluciones de ADN, cuando son calentadas a partir de 80º o sometidos a pH alcalino o ácido, es una repentina pérdida de viscosidad, acompañada de un aumento de la absorbancia a 260 nm. Este fenómeno se denomina desnaturalización o fusión porque tiene lugar bruscamente, apartir de una temperatura determinada. Se produce a causa de la rotura de los enlaces de hidrógeno que mantienen apareadas a las bases nitrogenadas, y de la alteraciones hidrofóbicas entre ellas, lo que conduce a una separación total o parcial de los filamentos de ADN, obteniéndose hebras separadas en toda su extensión (desnaturalización total) o en parte (desnaturalización parcial), sin que se veaalterado el esqueleto covalente formado por los enlaces entre el ácido fosfórico y la desoxirribosa.
Se denomina temperatura de fusión, Tm, a la temperatura que provoca, en una disolución de ADN, la desnaturalización de la mitad de la doble cadena, proceso que puede seguirse, midiendo el incremento de la absorbancia que tiene lugar (efecto hipercrómico), a medida que van desapareándose las...