Extracción de ADN



LICENCIATURA EN QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO
LABORATORIO DE FISIOLOGÍA CELULAR

PRACTICA
TITULO DE LA PRÁCTICA. Extracción de ADN

EQUIPO No.3
INTEGRANTES:
MORALES CERVANTES ANDREA
ROCHA FUENTE KAREN
ARROYO FRANCO DIANA
ABASOLO SANTANA ALDO
NOMBRE DEL PROFESOR/A: Ma. Del Carmen Lara
FECHA DE REALIZACIÓN: 09 de mayo del 2014

CALIFICACIÓN: __________
PONDERACIÓN:
Portada:0.5
Resultados: 3.5
Análisis y discusión de los resultados: 2.5
Conclusiones: 1.5
Cuestionario: 2.0
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TOTAL 10.0

OBJETIVOS

Conocer y realizar el método de extracción de ADN.
Purificar ADN mediante sustancias químicas
Correr en gel en ADN, medianteelectroforesis.


INTRODUCCIÓN

En PCR, el ácido desoxirribonucleico (ADN) es el analito. Por tanto, una buena muestra implica siempre un correcto proceso de obtención de esta molecula a partir de material biológico.
La extracción de ADN consta de una etapa de lisis, que consiste en romper las estructuras que confinan el citoplasma y liberar al medio su contenido y otra purificación, que implica laretirada de la solución dinal de la mayoría de elementos que pueden interferir enn la PCR.
De los tres pasos críticos que componen el análisis de patógenos por PCR, la extracción de ADN es quizás el mas desconocido y sobre el que mas contol podemos ejercer.

La extracción del ADN de las células o virus para una correcta extracción y purificación del ADN mediante un procedimiento químico son:

1.Lisis de las células o virus. Las sales caotropicas ayudan a romper la estructura tridimensional a macromoléculas como las proteínas o los acidos nucleicos consiguiendo su desnaturalización. La adicion de un detergente como el SDS es necesaria a menudo para eliminar las membranas.

2. Degradación de la fracción proteica asociada al ADN. Se consigue mediante la adicion de una proteasa. Lafracción proteica puede precipitarse mejor con la ayuda de sales como el acetato de amonio o el acetato sódico.

3. Purificación. Conta de3 fases:
Precipitación del ADN. El ADN es insoluble en alcohol, por lo que se puede precipitar etanol frio o isopropanol y recuperar mediante una centrifugación. El alcohol del sobrenadante se llevara las sales añadidas previamente.

Lavado de pellet. Se realizacon alcohol frio volviendo a centrifugarse.

Recuperación. El sedimento se puede suspender en agua o tampón Tris tras ser secado completamente.

La confirmación de la presencia de ADN se lleva a cabo mediante electroforesis en un gel de agarosa y posterior tinción con bromuro de etidio y observación con luz UV o directamente al espectrofotómetro mediente espectro de absorción de 200 a 350nm.El ADN purificado se puede cuantificar con un espectrofluorimetro mediante el uso de fruoroforos específicos.

ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA.
La electroforesis en gel es un método que se emplea para separar macromoléculas en función del tamaño, la carga eléctrica y otras propiedades físicas. El término electroforesis describe la migración de las partículas cargadas bajo la influencia de uncampo eléctrico. «Electro» se refiere a la electricidad y «foresis», del griego phoros, significa «trasladar». Así pues, la electroforesis en gel es una técnica consistente en aplicar corriente eléctrica a las moléculas para que atraviesen una
placa de gel. La fuerza motriz de la electroforesis es la tensión eléctrica aplicada a los electrodos en ambos extremos del gel. Las propiedades de unamolécula determinan la velocidad con que un campo eléctrico puede desplazarla a través de un medio gelatinoso.
Muchas macromoléculas biológicas importantes (por ejemplo, los aminoácidos, los péptidos, las proteínas, los nucleótidos y los ácidos nucleicos) poseen grupos ionizables y, a un pH determinado, existen en solución como especies cargadas eléctricamente, sean cationes (+) o aniones (-)....