Extracción de caseína por punto isoeléctrico

poUniversidad Nacional Autónoma de México.
Facultad de Ciencias.
Licenciatura en biología.

Biología molecular de la célula 1.
Profesores: Angélica González Oliver y
René de Jesús Cárdenas Vázquez
Grupo: 5041.
Alumnos:
* Bárcenas de los Santos Nancy Ysel
* Chávez García Lisette
* Farfán Beltrán Manuel Edday.
* Martínez Oriol Fausto Hernán
* Santiago Garduño VioletaPráctica 1: “Precipitación isoeléctrica de la caseína de la leche”

Fecha de realización: 24, 03/febrero, marzo/2011
Fecha de entrega: 10/marzo/2011


INTRODUCCIÓN
-Pendiente-

OBJETIVO:
Entender y aplicar el concepto de punto isoeléctrico para aislar la caseína de una muestra de leche.

METODOLOGÍA
1.-Preparamos 120 mL de leche descremada svelty a una concentración de 65 g/lcon agua destilada.
2.- Diluimos 30 mL de la leche descremada del paso anterior con agua destilada 1:3, obteniendo entonces 120 ml. La pusimos en un vaso de precipitados de 500 mL y agitamos en el agitador magnético con mosca. De esto tomamos 5mL lo colocamos en un frasco de gerber esterilizado y lo almacenamos a 4ºC.

3.- Precipitamos la caseína a partir de los 115 mL de la leche diluidadel paso 2, y posteriormente titulamos hasta alcanzar un pH de 4.8 y esto lo hicimos con el HCl 2%. Medimos constantemente el pH y anotamos los resultados en una tabla que presentaremos posteriormente.

4.- Dejamos reposar hasta que se formó un precipitado blanco en el fondo del vaso de precipitados, tomamos 5 ml del sobrenadante, lo almacenamos en otro frasco gerber esterilizado y loalmacenamos a 4ºC. Del sobrenadante que sobró tiramos lo más que nos fue posible.
5.- Vaciamos el precipitado que se nos formó en los tubos especiales para la centrifugación de una manera proporcional para cada tubo y centrifugamos a 3000 r.p.m durante 5 minutos, al término de este tiempo decantamos rápidamente el tubo de centrifugación para eliminar el sobrenadante.

Fotografía tomada de:http://www.somatco.com/centrifuge.htm
6.- Lavamos el precipitado con 8 mL de agua destilada, agitamos perfectamente con la varilla de vidrio con la finalidad de que todas las partículas de la caseína se pusieran en contacto con el disolvente.

Fotografía tomada de: http://www.hvn.es/servicios_asistenciales/unidad_de_reproduccion/seminograma_rem.php

7.- Volvimos a centrifugar de nuevo los tubos a3000 r.p.m durante 5 minutos y en cuanto salieron de la centrifugadora volvimos a eliminar el sobrenadante y lavamos de nuevo.
8.- Repetimos el paso 7
9.- Lavamos el precipitado con 8 mL de etanol al 75%. Agitamos de nuevo con la varilla de vidrio y volvimos a centrifugar a 3000 r.p.m durante 5 minutos y al término del tiempo eliminamos el sobrenadante.
10.- Tomamos todas las pastillas yla colocamos en el papel filtro que había sido previamente pesado en una balanza analítica y cuyo peso había sido registrado. El papel filtro con la caseína fue marcado y entregado a la profesora.
11.- La siguiente clase la profesora nos entregó el papel filtro con la caseína completamente deshidratada. Pesamos de nuevo el papel, ahora junto con la proteína y registramos el valor. De la resta deeste segundo valor menos el del papel filtro solo obtenemos el peso de la caseína.
Estos valores son presentados en la sección de resultados.

RESULTADOS
Tabla 1. “Tabulación de la titulación de las caseína”. Mililitros añadidos de HCl 2%, el pH y los cambios observados de la disolución donde se estaba aislando y purificando la proteína. Año 2011. Resultados de práctica de laboratorio.
HCl2% (mL) | pH | Cambios observados |
0 | 7.30 | La caseína se va depositando en el fondo conforme pasa el tiempo (se precipita) |
1 | 6.70 | |
2 | 6.31 | |
3 | 6.10 | |
4 | 5.93 | |
5 | 5.73 | |
6 | 5.65 | |
7 | 5.54 | |
8 | 5.29 | |
9 | 5.93 | |
10 | 4.83 | |

Tabla 2. “Peso de papel filtro solo, con caseína y peso de la caseína sola”. Año 2011. Resultados de...