Extracción de clorofila y su separacion cromatografica

“EXTRACCIÓN DE CLOROFILA Y SU SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA”
INTRODUCCION

La fotosíntesis es una de las funciones biológicas fundamentales. Por medio de la clorofila contenida en los cloroplastos, los vegetales verdes son capaces de absorber la energía que la luz solar emite como fotones y transformarla en energía química. Para que los sistemas vivientes utilicen la energía luminosa, primerodeben absorberla.
El pimento es toda sustancia que absorbe luz. Algunos pigmentos absorben todas las longitudes de onda luminosa y, por lo tanto, son negros. Algunos sólo absorben ciertas longitudes de onda y transmiten o reflejan las longitudes que no absorben. La clorofila, pigmento que imparte el color verde a las hojas, absorbe luz en las longitudes de onda del violeta y el azul y también enel rojo, es verde porque refleja la luz verde. Los distintos pigmentos absorben energía luminosa de diferentes longitudes de onda.
Los distintos grupos de planta y algas utilizan diversos pigmentos en la fotosíntesis. Existen varios tipos de clorofila que varían un poco en cuanto a su estructura molecular. En las plantas, la clorofila a es el pigmento que interviene directamente en latransformación de energía luminosa en energía química. La mayoría de las células fotosintéticas también contiene un segundo tipo de clorofila en las plantas es la clorofila b y un representante de otro grupo de pigmentos son los llamados carotenoides que pueden ser rojos, anaranjados o amarillos. Uno de los carotenoides de las plantas es el caroteno beta.
Los colores distintivos de los bacteriosfotosintéticos se deben a los pigmentos que contienen. La clorofila de los tiobacterios verdes, clorobium, es químicamente similar a la clorofila a. La clorofila de los bacterios purpúreos difiere químicamente en varios detalles de la clorofila a y es de color gris azulado pálido. La clorofila de los dos grupos de bacterios es bacterioclorofila.
El patrón de absorción de un pigmento se conoce comoespectro de absorción de esa sustancia, este dispositivo envía un haz de luz de cada longitud de onda sobre el objeto que se analiza y registra el porcentaje de cada longitud de onda que absorbe la muestra de pigmento, en comparación con un patrón de referencia.



OBJETIVO GENERAL
• Determinar que los cromóforos componentes de los vegetales presentan un espectro de absorción de luz muyespecífico.

OBJETIVOS PARTICULARES
• Extraer los pigmentos de hojas de espinaca.
• Separar cada uno e los pigmentos mediante un cromatografía de adsorción.
• Determinar el espectro de absorción de cada uno de los pigmentos separados por la cromatografía.

MATERIAL Y EQUIPO
1 Columna de vidrio de 15 m de altura por 1 cm de diámetro
1 Motero con pistilo
1 Embudo de vidrio
1 Embudo de separaciónpequeño
1 Vaso de precipitado de 100 ml.
1 Vaso de precipitado de 50 ml
1 pipeta graduada de 5 ml
1 Pipeta Pasteur con bulbo
1 Soporte universal con anillo
1 Pinza para bureta
1 Parrilla eléctrica
1 Cristalizador
Fibra de virio
Hielo
Espectrofotómetro y celdas
Tubo de hule
100 g de hojas de espinaca fresas
Gasas de algodón
50g de azúcar de repostería o azúcar de mesa finamentemolida
10g de azúcar granulada
Reactivos
Etanol
Éter dietílico
Éter de petróleo
Hexano
Sulfato de sodio
Metanol
Soluciones
Disolución de éter-metanol-hexano (45:15:5 v/v)
Disolución de hexano-éter (2:3 v/v)






PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
A. Extracción de clorofila
Se lavaron algunas hojas de espinaca y se les quitó los peciolos y las venas grandes. Se pesaron 5 gr., deespinaca.
Los 5 gr., de espinaca se maceraron con 10 ml de etanol en hielo. Se le agregó 10 ml de éter de petróleo.
Se filtró el macerado usando una gasa. Al embutido se le agregó 10 ml de éter-metanol-hexano y 15 ml de agua.
Se agitó suavemente y se dejó reposar hasta que se formaron 2 fases.
Se separó la fase acuosa y la orgánica se colocó en un vaso de precipitado de 50 ml.
Se le agregó...