Extracción de DNA con ChargeSwitch gDNA Plant Kit

Extracción de DNA con el Kit “ChargeSwitch gDNA Plant Kit” Cat. CS18000

Material inicial: 100mg de hoja, tejido o semilla
Rendimiento: Hasta 7g en 150l
Para obtener alto rendimiento de ADN yreducir la degradación, use muestras de planta joven y congele la muestra inmediatamente después de la colecta.
Requerimientos
Muestra vegetal
Bisturí y/o navaja
Mortero y pistilo
Nitrógenolíquido
Hielo
Micropipetas y puntas de 1000ul, 100ul 10ul
Tubos eppendorf 1.5 o 2ml
Vortex
Guantes
Centrifuga
Recipiente para desechos líquidos y puntas

1. Enfríe el Buffer de Precipitación (N5)sobre hielo
2. Macere el tejido con nitrógeno líquido hasta obtener un polvo fino.
3. Añada 1 ml de Buffer de Lisis (L18) y 2 μl de RNase A al tejido.
Nota: si la solución es muy viscosa, añadamás Buffer de Lisis (L18) y modifique en proporción los pasos 5 y 7

4. Homogenice con con vortex
5. Añada 100 μl de SDS al 10% al lisado manteniendo la proporción 10:1 con el Buffer de Lisis(L18) e incube a temperatura ambiente por 5 minutos.
6. Añada 400 μl del Buffer de Precipitación (N5) al lisado y mezcle por inversión hasta que se forme un precipitado. Mantenga la proporción 10:4con el Buffer de Lisis
7. Centrifugue a máxima velocidad por 5 minutos a temperatura ambiente para producir un lisado claro y transfiera el lisado a un nuevo tubo estéril
8.-Añada 100 μl dedetergente al 10% (D1), al lisado
9.- Vortecee el tubo que contiene las perlas magnéticas para resuspenderlas en el buffer y añada 40 μl de las perlas resuspendidas al lisado
10. Mezcle gentilmente porpipeteo, arriba y abajo cinco veces, usando una micropipeta de 1ml, ajustada a 900 μl para evitar formar burbujas e incube a temperatura ambiente por 1 minuto.
11. Coloque el tubo sobre el MagnaRack™hasta que se forme un pellet (aproximadamente 1 minuto)
12. Sin remover el tubo del magneto, cuidadosamente aspire y descarte el sobrenadante sin tocar el pellet de perlas y proceda a lavar el ADN....