extracción de DNA

PRACTICA No 6
DISTRIBUCION DE ENZIMAS DIGESTIVAS
INTRODUCCIÓN
En los organismos superiores, a lo largo de todo su tracto digestivo, se produce una serie de enzimas que van a cumplir una misión específica en el catabolismo de sustancias determinadas, lo que consiste en degradar dichas sustancias de forma compleja y llevarlas a sus unidades mínimas por las que están compuestas y de esta formaser absorbidas por el organismo. Estas enzimas son específicas y actúan en sitios determinados en donde estas proteínas encuentren condiciones ideales tales como pH, temperatura y demás factores indispensables para su normal funcionamiento.
En los mamíferos, la digestión por procesos enzimáticos comienza en la boca. Las glándulas salivares segregan ptialina (amilasa), enzima que desdobla el almidónen azúcar. El estomago segrega ácido clorhídrico (HCl) que disuelve los componentes resistentes, a la vez que activa la cadena de varios zimógenos, haciendo que el alimento sea mas fácilmente disponible para las enzimas digestivas. Las diversas células que recubren las paredes del estomago, también producen mucus y enzimas como la pepsina la cual inicia el desdoblamiento de las proteínas. Sinembargo, las principales fases de la digestión tienen lugar en el intestino delgado. El páncreas y el hígado, glándulas anexas, también juegan un importante papel en la digestión. La primera, es una fuente importante de enzimas digestivas tal como el quimiotripsinógeno que es vertido en el intestino delgado. El hígado produce bilis, que se acumula en la vesícula biliar y después se vierte en eintestino. Esta sustancia emulsiona las grasas haciéndolas mas expuestas para ser atacables por las enzimas.
1. OBJETIVOS
Al terminar esta practica el estudiante podrá:
• Determinar la producción o no de algunas enzimas digestivas en el tracto digestivo de un animal.
• Identificar, por medio de reacciones específicas, cada una de dichas enzimas.
• Determinar experimentalmente los sitios donde selocaliza la máxima concentración de la amilasa, la invertasa, las proteasas y las lipasas en el tracto digestivo de un animal.
• Asociar la actividad de una enzima específica sobre su sustrato, con el sitio donde actúa y las condiciones para que realice su actividad óptima.
2. MATERIALES
• Un animal (ratón, cucaracha, grillo, etc).
• Equipo de disección.
• Toallas de papel.
• Tubos de ensayo.• Cajas de petrí.
• Pipetas goteros.
• Trozos de película fotográfica velada.
• Cinta de enmascarar.
• Hielo.
• Gradilla.
• Baños de maría a 37 °C y 100 °C.
• Ultraturra u homogenizador.
• Algodón.
3. REACTIVOS
• Solución de NaCl al 0.87%.
• Solución de sacarosa al 5%.
• Solución de glucosa al 5%.
• Solución de NaOH al 0.005 N.
• Eter o Cloroformo.
• Solución de almidón al 1%recién hervido.
• Fenolftaleína.
• Lugol.
• Reactivo de Benedict.
• Aceite de oliva.
4. METODO
Se sacrifica el animal y con la ayuda del equipo de disección se extrae el aparato digestivo, dividiéndolo luego en 4 partes: Buche, proventriculo, intestino medio e intestino posterior, con la debida indicación del profesor o monitor.
Tomar luego una fracción de cada parte y lavar suficientemente ensolución salina (0.87%) para eliminar desechos. Llevar a la ultraturra cada fracción por separado en un tubo de homogenizado para macerar con unos 5 mL de solución salina al 0.87%. sacar 1 mL de cada macerado y juntar en un tubo de ensayo; llevarlo al baño de maría a 100 °C y dejar por 10 minutos en agua hirviendo. Con el resto se realizarán pruebas para determinar las siguientes enzimas: invertasa,amilasa, lipasas y proteasas.
Prueba para determinar Invertasa:
Se toman 6 tubos previamente identificados con cada una de las fracciones del sistema digestivo, las dos ultimas se identificaran como controles negativo y positivo respectivamente.
A los 5 primeros tubos, se les agrega 1 mL de solución de sacarosa al 5% y 0.5 mL de cada uno de los homogenizados, incluyendo el que estaba en...