Extracción del carotenoide bixina a partir del achiote.

Práctica 7.
Extracción del carotenoide Bixina
a partir del achiote. (Bixa Orellana)


1. Procedimiento detallado:

a. Extracción por reflujo.

* Para iniciar el proceso llenamos una probeta con 100 ml de etanol y al mismo tiempo medimos 50 gr de semillas de achote no pulverizadas en una balanza analítica.

* En un matraz de vidrio colocaremos los 50 gr de semillas deachiote pesados y le verteremos los 100 ml anteriores. La forma del matraz nos ayudará a agitar con facilidad el líquido durante un buen rato; si preferimos, también podemos hacer uso de una bagueta.

Las semillas de achote no se diluirán como en una solución, sino que el etanol irá tomando el colorante de estas en una lenta penetración durante unos minutos, sin embargo no lo hará completamente.* Para obtener el colorante de Bixina (como colorante rojizo). El procedimiento consta en calentar el contenido del matraz sobre un Hot Plate. Este equipo posee un agitador magnético con la forma de una especie de pastilla alargada que, al estar en contacto con la superficie del equipo, comienza a girar sobre su eje. Entonces nosotros colocaremos el agitador magnético dentro de la disoluciónen el matraz y conectaremos en su orificio un condensador refrigerante. Al mismo tiempo éste estará conectado a través de una vía doble: una de ellas al caño de agua y la otra, suelta en el lavamanos.

El condensador refrigerante es un instrumento de vidrio que se usa para condensar los vapores que se desprenden del matraz de destilación, por medio de un líquido refrigerante que circula poréste, usualmente agua. El vapor que es producido por la ebullición del etanol en el Hot Plate, al chocar con la parte fría del condensador ref. se enfriará y caerá de nuevo al interior del matraz.

* El tiempo del reflujo se cuenta a partir del momento en que cae la primera gota del disolvente condensado (etanol). Una vez que caiga la gota tomaremos 15 minutos de espera.
* Al finalizar eltiempo, desmontamos el equipo y llevaremos el extracto a filtrarlo al vacío (embudo Buchner, matraz kitasato, papel filtro, equipo de filtración al vacío).

b. Extracción asistida por ultrasonido.

* Llenamos una probeta con 100 ml de etanol y medimos 50 gr de semillas de achote en una balanza analítica. Vertemos ambos en un matraz para contener la mezcla con agitación durante unos minutos.* Llevamos el matraz a la zona de cavitación del baño de ultrasonido y lo dejamos en reposo durante 15 minutos a una temperatura ambiente.

El agua en el ultrasonido, al ser agitada, produce burbujas: éstas chocan contra el material vegetal (semillas) haciendo que el disolvente (etanol) las penetre y se produzca una mezcla en la que el achote desprende colorante de carotenoides.

Zonade cavitación se llama a las zonas de mayor intensidad en las ondas de ultrasonido.

* Al finalizar el tiempo, procederemos a filtrar al vacío el extracto extraído.

* Destilamos el disolvente en un equipo soxhlet o en un rotavapor, hasta obtener el extracto más concentrado. (Retirar el disolvente aplicando presión y temperatura.) Se hace el secado y se registra el peso.

* Comoúltimo paso a realizar, evaluaremos la pureza de los cristales de bixina usando una cromatografía en capa fina (Thin Layer Chromatography, TLC).

Cromatografía: Técnica que se utiliza para separar los componentes de una mezcla.

* Requerimos de una sílica de gel, de la cual se delimitarán 0.5 cm a ambos extremos de la laminilla con una línea hecha por un lápiz. Luego marcaremos suavementecuatro puntos distanciados sobre la línea. Numeramos los puntos del 1 al 4.
* Con la ayuda de capilares que fueron estirados y partidos por acción del calor de un mechero, sembraremos muestras sobre los puntos trazados:
Sobre los puntos 1 y 2 muestra extracción por reflujo.
Sobre los puntos 3 y 4 muestra extracción ultrasonido.

* Llenamos un beaker con solvente eluyente de 9,4 ml de...