Extracción Lípidos
Páginas: 3 (655 palabras)
Publicado: 20 de julio de 2011
PROTOCOLO DE EXTRACCIÓN DE LÍPIDOS A PARTIR DE MICROALGAS
Nota: la muestra a ser procesada es el pellet de la centrifugación de 10 mL del cultivo. Esta centrifugación debe realizarse entubos de vidrio previamente lavados con jabón Alcornox y tratados con acetona pura para evitar picos que puedan interferir al momento de analizar el contenido lipídico por GC/MS (tres lavados conacetona). Todos los materiales de vidrio utilizados durante el proceso de extracción deben ser tratados de la misma manera.
Pasos a seguir:
1. Extracción
a) Tomar la muestra yañadirle 2 mL de Cloroformo-metanol 1:1.
b) Agitar en el vortex durante 15 – 20 minutos o hasta que el pellet se deshaga completamente.
c) Transferir a un balón, utilizando una pipetaPasteur.
d) Adicionar éter al tubo para remover los residuos de la muestra de las paredes del tubo.
e) Transferir el contenido de tubo al balón
2. EvaporaciónPara este paso se utiliza un evaporador rotativo (ver foto).
[pic]
a) Llenar con agua regular el contenedor del equipo de evaporación
b) Montar el balón, ensamblándolo a la trampa degolpe (balón con una salida superior y una inferior) y sujetando todas las partes con grapas o “clips” de diversos tamaños, según el tamaño del balón.
c) Ajustar la temperatura a 70°C
d)Mover el brazo del equipo hacia abajo hasta que el balón se introduzca en el agua aproximadamente hasta la mitad.
e) Cerrar la llave de vidrio. Este paso es muy importante, pues es el que generael vacío.
f) Ajustar el botón de velocidad de rotación hasta una posición intermedia.
g) Esperar hasta que toda la muestra se haya evaporado.
h) Retirar el balón del equipo
3.Metilación
a) Añadir 4 mL de metanol al balón
b) Añadir 4 gotas de ácido clorhídrico (HCl) puro, utilizando una pipeta Pasteur de punta larga.
c) Tapar el balón con una tapa...
Nota: la muestra a ser procesada es el pellet de la centrifugación de 10 mL del cultivo. Esta centrifugación debe realizarse entubos de vidrio previamente lavados con jabón Alcornox y tratados con acetona pura para evitar picos que puedan interferir al momento de analizar el contenido lipídico por GC/MS (tres lavados conacetona). Todos los materiales de vidrio utilizados durante el proceso de extracción deben ser tratados de la misma manera.
Pasos a seguir:
1. Extracción
a) Tomar la muestra yañadirle 2 mL de Cloroformo-metanol 1:1.
b) Agitar en el vortex durante 15 – 20 minutos o hasta que el pellet se deshaga completamente.
c) Transferir a un balón, utilizando una pipetaPasteur.
d) Adicionar éter al tubo para remover los residuos de la muestra de las paredes del tubo.
e) Transferir el contenido de tubo al balón
2. EvaporaciónPara este paso se utiliza un evaporador rotativo (ver foto).
[pic]
a) Llenar con agua regular el contenedor del equipo de evaporación
b) Montar el balón, ensamblándolo a la trampa degolpe (balón con una salida superior y una inferior) y sujetando todas las partes con grapas o “clips” de diversos tamaños, según el tamaño del balón.
c) Ajustar la temperatura a 70°C
d)Mover el brazo del equipo hacia abajo hasta que el balón se introduzca en el agua aproximadamente hasta la mitad.
e) Cerrar la llave de vidrio. Este paso es muy importante, pues es el que generael vacío.
f) Ajustar el botón de velocidad de rotación hasta una posición intermedia.
g) Esperar hasta que toda la muestra se haya evaporado.
h) Retirar el balón del equipo
3.Metilación
a) Añadir 4 mL de metanol al balón
b) Añadir 4 gotas de ácido clorhídrico (HCl) puro, utilizando una pipeta Pasteur de punta larga.
c) Tapar el balón con una tapa...
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