Extracción Simple De Adn

Objetivos


Obtener ADN de un tejido vegetal, a partir de métodos simples
Separar el ADN.
Comprender los principios de extracción utilizados durante la práctica.



Introducción


El ácido desoxirribonucleico, más conocido como ADN, se encuentra presente en todo organismo, incluyendo virus, bacterias, vegetales, animales, etc.
El ADN es una macromolécula formada por una doblecadena en forma helicoidal antiparalela, unidas mediante puentes de hidrógeno. Posee unidades simples que se encuentran conectadas entre sí, estas unidades son los nucleótidos. Cada nucleótido está formado por un azúcar (desoxirribosa), una base nitrogenada, que puede ser Adenina(A), Timina (T), Guanina (G), ó Citosina (C), y además contiene un grupo fosfato, que es el encargado de unir cadanucleótido a los otros. La secuencia de ADN es específica, pues ésta es la que contiene la información genética, en la cual las bases nitrogenadas son las que indican la secuencia (de acuerdo a como estas estén dispuestas entre sí) y la función específica que cumple cada gen, lo que permite que cada ser vivo sea distinto del otro.




















Procedimiento ExperimentalPara comenzar con el proceso de extracción de ADN de un vegetal, en este caso el de una frutilla, lo primero que se debió realizar fue el macerado en un mortero, agregando aproximadamente unos 20 mL de agua destilada, una vez obtenido el macerado homogéneo, se le agregó media cucharada de sal y se revolvió para mezclar, enseguida se agregó media cucharada de detergente “Quix” y nuevamente serevolvió con cuidado, pues se debía evitar que se formara espuma con el detergente. Al finalizar con esta primera etapa de preparación se comenzó con la separación física, utilizando el método de centrífuga, se vaciaron 20 mL de la mezcla a un tubo de ensayo, se colocó alrededor de 6 minutos en la centrífuga( a mediana-baja intensidad), luego cuidadosamente se retiro el tubo de ensayo y con ungotero se extrajo la parte líquida vigilando que no se mezclara con la parte sólida (obtenidas por el método utilizado), y se vertió a otro tubo, éste se dejo enfriar en hielo por unos minutos y enseguida se le agregó alcohol frío, comenzó a visualizarse el ADN. Finalmente se introdujo una brocheta al tubo con la reacción, y se extrajo el ADN.


Resultados


Cada paso seguido en elprocedimiento, permitió identificar la función que estos cumplen:
Agua destilada: facilita el macerado
Sal: permite que la mezcla se espese, haciéndola más soluble ( H2O más polar), y también desnaturaliza el ADN.
Quix: es un desengrasante, por lo cual es esencial su uso, ya que permite que la membrana de la frutilla, compuesta por una bicapa lipídica (ácido graso más glicerol), se rompa, pues eldetergente interactúa directamente con los lípidos que contienes grasa, permitiendo que todo lo que se encuentra dentro de la membrana se mezcle con el agua destilada que está en e exterior.
Método de Centrífuga: separa la parte sólida de la frutilla macerada (Pellet), de la parte líquida de ésta (sobrenadante), lo que permite la posterior extracción del sobrenadante que debe ser mezclado con elalcohol.
Alcohol y reacción fría: Permite que la solución precipite mejor, pues al estar fría la reacción interactúa de mejor manera con el alcohol, al realizar esto se produce la Constante dieléctrica , la cual hace que se suelte el ADN.




Observaciones


El macerado de frutilla-sal-Quix forma una mezcla homogénea y espesa.
Luego de la separación física mediante centrifugado, se puedediferenciar claramente la parte sólida del macerado, con la parte líquida. Esta última tiene un color más claro que el color original, aunque este factor puede variar dependiendo de la concentración de pigmento.
Al agregar alcohol al líquido frío, extraído de la mezcla luego de la separación por centrifugado, se observa la formación de dos capas, una formada por el líquido del macerado (capa...