Extraccion Adn Salting Out

Extracción de ADN por método Salting Out
También conocido como cristalización anti disolvente, cristalización precipitación o ahogando en un método para separar proteínas basadas en el principio deque las proteínas son menos solubles a altas concentraciones de sal. La concentración de sal necesaria para la proteína a precipitar difiere de proteína a proteína.
* Procedimiento general: Lamuestra de proteína soluble debe tener una concentración aproximada de 1mg/mL en un buffer que contenga como máximo 50mM de EDTA. Lentamente agregar la solución de sulfato de amonio hasta obtener elporcentaje de saturación deseado, agitar de 10 a 30 minutos. Centrifugar y desechar el sobrante.
Fenol-cloroformo
Permite obtener un ADN libre de proteínas y enzimas. Se ha utilizado con aquellasmuestras cuyo ADN amplificado se quería secuenciar y tanto a partir de las células obtenidas en cultivo como de teliósporas en aquellos casos en los que no hemos podido conseguir la germinación.
1.Consiste en sacar ADN de las células sangre periférica o de los tejidos por diferentes métodos bioquímicos. El más utilizado es el Fenol-Cloroformo.
2. Mediante un espectrofotómetro para ADN secuantifica la cantidad de ADN que se extrajo de la célula.
3. Aumentar la cantidad de ADN extraído en forma exponencial, mediante un aparato llamado termociclador. Para este proceso se utiliza unmecanismo químico conocido como Reacción de Cadena de la Polimerasa o PCR.
4. Luego de la anterior amplificación se tiene una gran cantidad de ADN repetitivo específico el cual colocamos en un EquipoAnalizador Automático de ADN para la determinación de cada perfil genético individual.
5. Una vez que se obtiene el perfil genético de cada individuo, se realiza el análisis de los mismos.Obtención de ADN con Fenol-Cloroformo:
1. 2.5mL de muestra + 2.5mL de Fenol-Cloroformo isoamílico (25:24:1).
2. Agitar invirtiendo el tubo durante 5 minutos.
3. Centrifugar a 2500rpm, 7 minutos...