extraccion ADN

Extracción de ADN por el método de salting out y electroforesis


 Introducción
La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas quepuedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la unión de las proteínas al ADN.Análisis y resultados.
Salting out  es un método de purificación que utiliza la reducida solubilidad de ciertas moléculas en una solución de muy alta fuerza iónica. Salting out es típicamente, pero no limitado a, la precipitación de grandes biomoléculas tales como proteínas. También puede ser una herramienta poderosa para separar clases de proteínas que varían en tamaño, carga, y el área desuperficie entre otras características. Un método de controlar la precipitación es el utilizar los diferentes efectos de diversas sales y sus concentraciones respectivas. La capacidad de una sal para inducir la precipitación selectiva depende de muchas interacciones con el agua y los solutos.
El procedimiento se realizó en las fases indicadas, rompiendo membranas y limpiando excesos y moléculas sobrantesque iban quedando al centrifugar ; tanto que las velocidades de centrifugación y tiempo, como las concentraciones de los reactivos fueron los mismo en su mayoría que los usados por los demás compañeros; aunque se usó parte del alcohol isopropilico diferente debido a que el dispuesto se agoto; es posible que su temperatura y concentración hallan sido diferentes e influyo en el procedimiento“lavando” no solo las proteínas y demás biomoleculas incluido el DNA .
Es de resaltar que la cantidad de sangre que se nos asigno fue mucho menor a la usada por los demás compañeros para este método; también hicimos uso de solo 2 tubos reduciendo las posibilidades a condiciones mínimas; salting out usa mínimo 4 tubos que garantizan tan solo una efectividad del 60% ya que se tienen en cuenta factoresexternos como la posible contaminación de los implementos usados.
En los momentos que se descartó sobrenadante posterior a la centrifugación se hizo de manera óptima y con supervisión de la profesora por lo que se concluye es que uno de los principales factores para el resultado negativo es el cambio de alcoholsin dejar atrás la cantidad de sangre usada.
No se obtuvo la hebra blanca por lo que laprueba resulto negativa.

Electroforesis
La concentración e integridad del ADN extraído, así como el tamaño de distintos fragmentos de ADN (por ejemplo, productos de PCR) pueden ser verificadas mediante electroforesis en geles de agarosa o poliacrilamida. La electroforesis consiste en la separación de moléculas (proteínas, isoenzimas, ácidos nucleicos) a través de una matriz tamponada (agarosa,acrilamida, almidón). La matriz funciona como un filtro, separando las moléculas en un campo eléctrico, de acuerdo al tamaño y la carga neta que poseen. En el caso de los ácidos nucleicos, el grupo fosfato es el responsable por la fuerte carga negativa en condiciones de pH neutro, haciendo que los fragmentos migren hacia el polo positivo (ánodo) durante la electroforesis (Posso y Ghneim 2008).La resolución y velocidad de separación de fragmentos de ADN por electroforesis son reguladas a través de la concentración de agarosa (o acrilamida) en el gel y el voltaje aplicado durante la electroforesis. La agarosa funciona como un filtro en el que los fragmentos de menor tamaño migran más rápidamente hacia el ánodo que aquellos de mayor tamaño. Al aumentar la concentración de agarosa se...