Extraccion Adn
BIOL3300-012L
Informe del Lab#3: Base molecular de la herencia - Extracción del ADN
¿Cuál es la función del Tris-HCl y del EDTA?
El Tris-HCl es un amortiguador. Losamortiguadores se encargan de mantener el pH en la solución. Este en específico es una substancia básica. Con esto, se evita que se degrade el DNA y el RNA en las células. El EDTA se usa para quelarlos iones positivos de magnesio, manganeso y calcio dentro de la célula. Así, la nucleasa se ata al EDTA en vez de atarse al grupo fosfato entre los ácidos nucleicos y se previene que quiebre losmismos, así estabilizando el ADN. A la vez, destabiliza la membrana al romper las moléculas hidrofóbicas presentes en la misma.
¿Por qué desestabiliza la membrana?
En parte, la membrana celular estahecha de ácidos grasos unidos a un grupo fosfato. El EDTA interactúa químicamente con ambas así solubilizando los lípidos y las proteínas de la membrana. Se empiezan a crear poros en la membrana yeventualmente se destruye por completo.
¿Qué es una solución quelante?
Una solución quelante es una que remueve los metales que están flotando por el citoplasma y que las endonucleasas necesitan paraactivarse y partir el fosfolípido del nucleótido. Al usarla mantenemos la muestra de ADN intacta por las mismas.
¿Cuál es la función del alcohol?
El etanol frío se usa para extraer el ADN delresto de los solutos; lo purifica y lo concentra. Este lo limpia y hace que se precipite. Por ende, al centrifugarse la micropipeta, la solución de alcohol con el ADN queda separado y superior a losremanentes de la célula.
¿Por qué se precipita el DNA?
El ADN se precipita porque el alcohol, al no ser soluble en agua, lo obliga (por su carga negativa) a unirse entre ellos conjunto a los gruposfosfatos y separándolo de los enlaces que puede formar con el agua. Cuando se centrifuga, se separan los conglomerados de ADN suspendidos en el alcohol de los remanentes de las células y cualquier...
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