extraccion de adn cromosomico



Extracción de ADN cromosómico de Escherichia coli

Introducción y objetivos
Las bacterias son organismos procariotas, es decir, sus células no tienen un núcleo celular diferenciado.Trabajamos en este caso con la bacteria Escherichia coli. Esta bacteria tiene la característica de ser “Gram negativa” las cuales, a diferencia de las “Gram Positivas”, poseen una pared depeptidoglicano más fina y, además de contar con una membrana interna, también cuentan con una membrana externa. Su único ADN es circular, cerrado, desnudo y puede estar asociado a algunas proteínas. Seencuentra superenrollado negativamente teniendo aproximadamente 4,6.106 pares de bases, los cuales estirados equivaldrían a 1mm.
La extracción de ADN bacteriano tiene como objetivo principal obtener lamayor cantidad posible de ADN, libre de proteínas y de restos celulares. Procedimos con el método de extracción de ADN por precipitación salina.
Nuestro objetivo fue entender cómo a través deagregados de distintas soluciones (ácidos, buffer, etanol, entre otros) podemos generar una lisis celular, la cual consiste en la ruptura de la membrana celular de la bacteria para producir la salida delmaterial intracelular, y luego una precipitación, la cual consiste en separar el ADN cromosómico de las demás sustancias que componen a estas células procariotas, y así finalmente poder extraer el ADNcromosómico de la bacteria Escherichia coli.

Materiales y métodos
Para la extracción de ADN cromosómico de las bacterias ya mencionadas, procedimos siguiendo el protocolo del TP 1 de IBMC, año2014, descripto en la página 8, partiendo de un cultivo de bacterias que fue incubado durante una noche y lo tratamos para provocar la lisis celular con lisozimas y Triton X100 (un tipo de detergente),luego precipitamos el ADN neutralizando las cargas del mismo, extrayéndolo para proceder a al lavado de sales con una solución de Etanol y H2O d.

Resultados
Luego de todos los procedimientos...