Extraccion de adn de hongo

Extracción de DNA de hongos filamentosos
Resumen
El ADN es una molécula presente en todas las células de los seres vivos y es la encargada de codificar todo lo que nosotros somos, desde el color del pelo hasta las proteínas que tenemos en nuestra sangre. El ADN es una molécula cargada que esta asociada a proteínas y en el caso de los organismos eucariontes está encerrado dentro de un núcleo.Para extraer el ADN primero es necesario romper las células y luego se necesita separar el ADN del resto de los componentes celulares como proteínas y membranas lipídicas 

JORGE CALLEJA |
Palabras clave
Aspergillus niger
ADN

1. Introducción
El color es la principal característica macroscópica para la identificación de los grupos deaspergilos. Poseendistintos tonos de verde, pardo, amarillo, blanco, gris y negro. Las cabezas conidiales presentan bajo el microscopio cuatro formas básicas: globosa, radiada, columnar o claviforme.
A simple vista las más grandes suelen parecer diminutas alfileres sobre el substrato.
En los aspergilos, los conidios constituyen cadenas que se originan en la célula conidiógena o fiálide. En algunos aspergilos haycélulas adyacentes a las fiálides denominadas métulas o células de soporte. Los Aspergillus poseen una o dos series de células sobre la vesícula, o bien presentan simultáneamente cabezas de ambos tipos
2. Materiales y métodos
Se coloco en el tubo eppendorf la muestra y 600 microlitros de buffer de lisis junto con las perlas de cristal para así llevarlos al vortex para lisar la muestra. Y secentrifugo a 10,000 rpm.
La muestra se calentó a 70-72°C durante 15 minutos. Despues se le adiciono una solución y se volvió a centrifugar. Siguiente se añadió 300 microlitros de solución de Grinding y y 500 microlitros de fenol y se volvió a centrifugar.
Esto se llevó a centrifugar a 10 mil rpm por 10 minutos y se obtuvieron 3 fases. Se tomó el sobrenadante y se colocó en otro tubo eppendorf endonde se le agregaron 20 microlitros de acetato de sodio 3 M pH 5.2 Y 100 microlitros de isopropanol para de nuevo centrifugar a 10 mil rpm durante 15 minutos.
Se formó una especie de gel en la punta del tubo eppendorf el cual se invirtió para desechar el líquido sobrante.
A lo que quedó en el tubo se le adicionaron 500 microlitros de etanol y se centrifugó durante 15 minutos a 10 mil rpm, Estose decantó y se resuspendió en 20 microlitros de TE (10mM TrisCl pH 8.0 y 1mM de EDTA).

3. Teoría
El ADN (Ácido desoxirribonucleico) es el material genético de todos los organismos celulares (productores, consumidores, descomponedores y bacterias) y casi todos los virus. Este lleva la información necesaria para dirigir la síntesis de proteínas (producción de las proteínas que necesita lacélula o el virus para realizar sus actividades y desarrollarse), y la replicación (reacciones por medio de las cuales el ADN se copia a sí mismo)
Los organismos vivos formados por células que tienen núcleos verdaderos, es decir, separados del citoplasma por una membrana doble bien diferenciada, se denominan eucariontes o eucariotas. Estos organismos tienen bien definido su ADN del resto de lacélula. Estos organismos eucariotas pueden ser unicelulares, en el caso de los protozoos y unicelulares en el caso de los hongos (descomponedores), plantas (productores) y metazoos (consumidores). Las células de la cebolla (experimento) son eucariotas.
Por el contrario, los procariotas o procariontes, son organismos cuyos núcleos celulares no están envueltos por una membrana nuclear, por lo quesu ADN está en contacto con el citoplasma. La mayoría de estos organismos procariotas son bacterias.
A continuación se muestra un protocolo universal de extracción de DNA genómico con el que se pueden extraer entre 100 y 400μg de DNA:
A. Centrifugar la suspensión durante 5min a 3600×g a 4°C. Eliminar el sobrenadante. Resuspender el pellet en 3,78mL de buffer de suspensión.
B. Añadir...