Extraccion De Adn Practica

Materia: Bioquímica
Tema: Extracción de ADN
Práctica #10
Alumnos:
Cano Mena Mauricio
Díaz Ramírez Alejandra
Garduño Galeana Diana
Solís Estrada Garth Erick
Enríquez Álvarez Ricardo
Introducción
Los ácidos nucleicos son polímeros de núcleotidos, los núcleotidos tienen 3 componentes principales:
Un azúcar con 5 carbonos (ribosa), uno o más grupos fosfato y un compuesto nitrogenadollamado base. Las bases que se encuentran en los núcleotidos son pirimidinas y purinas sustituidas. La pirimidina tiene un solo anillo de 4 átomos de carbono y 2 de nitrógeno y la purina tiene un sistema de anillos fundidos de pirimidina y imidazol.
El modelo de ADN propuesto por Watson y Crick en 1953 se basó en las estructuras conocidas de los nucleósidos (formados por un purina o una pirimidina y unazúcar de 5 carbonos), sobre figuras de difracción de rayos X que obtuvieron Rosalind Franklin y Maurice Wilkins de fibras de ADN, y en las equivalencias químicas naturales notadas por Chargaff. El modelo de Watson- Crick sugería que el ADN tenía doble hebra (doble cadena) y que las bases de una hebra se apareaban con las bases de la otra:
El ADN contiene los genes y esta empaquetado enestructuras que se denominan cromosomas, el término cromosoma solo señala las estructuras densas teñidas de forma oscura que se veían en el interior de las células eucariotas durante la meiosis o la mitosis.
Hipótesis:
Dependiendo de la muestra de tejido que tengamos, entonces será el tamaño de la muestra de ADN al momento de aplicar la técnica de extracción con el detergente y el alcohol
Si el ADN esuna macromolécula muy grande, entonces al momento de hacer la extracción no se nos dificultará tomarlo.

Procedimiento
1. Triturar de 5-6 higados de pollo en la licuadora. Añadir arena para que al triturar se puedan romper las membranas de y queden los núcleos sueltos.
2. Añadir al triturado, 50 centímetros cúbicos de agua. Remover hasta hacer una especie de papilla.
3. Filtrar varias vecessobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado por romper.
4. Medir el volumen del filtrado con una probeta.
5. Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M. Con esto conseguimos producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina.
6. A continuación se añade 3 centímetro cúbico de SDS. (Nota: Si no se dispone de este producto puedesustituirse por un detergente de vajillas, tipo Mistol o similar. La acción de éste detergente es formar un complejo con las proteínas y separarlas del ADN. Así nos quedará el ADN libre de las proteínas que tiene asociadas.
7. Añadir mediante una pipeta 50 ml de alcohol de 96. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase,precipita el ADN.
8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección. Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupación de muchas fibras de ADN.
9. Esta práctica puede completarse con una tinción específica de ADN.Tenemos que tomar una muestra de las fibras que se van depositando sobre la varilla de vidrio ydepositarlas sobre un portaobjeto.
10. Teñir durante unos minutos con un colorante básico.
11. Observar al microscopio.
Discusión:
Cuando se le agrega el cloruro de sodio al filtrado del tejido se consigue producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina. Esto se debe a la presión Osmótica que es: El liquido del núcleo es mucho menor concentración salina que elexterior por lo que el intercambio de líquidos hace que, aunque el agua pasa de la zona de baja concentración a la de alta concentración y viceversa, hay un flujo neto mayor de moléculas de agua que pasan desde la zona de baja concentración a la de alta. La membrana nuclear y celular son semi permeables porque contiene poros, al igual que cualquier filtro. El tamaño de los poros es tan minúsculo...