Extraccion de adn

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Materia: Biología Molecular I
Practica N°:2
Fecha: 26-04-2011
Curso/Paralelo: 4to “A”

1. TEMA: Extracción de ADN
2. OBJETIVOS:
Objetivo General:
Obtener DNA de una hoja de acelga mediante la utilización de un protocolo, para la utilización futura de esta muestra.
Objetivos Específicos:
• Utilizar correctamente los materiales y reactivosde la práctica de extracción de DNA.

• Conocer el protocolo de DNA zol Reagent para la extracción de DNA.

• Conocer otros protocolos para la extracción de DNA y compararlos con el utilizado en la práctica




3. INTRODUCCION:
El acido desoxirribonucleico o ADN es una molécula presente en todas las células de los seres vivos y es la encargada de codificar todo loque nosotros somos, además que es la encargada de controlar la herencia. El ADN es una molécula que posee la información genética la cual es pasada de generación en generación permitiendo la variabilidad genética así como la perpetuación de las especies.
La biología molecular es una de las ciencias donde se realiza manipulación genética, de donde se pueden obtener muestras y analizarlas paradeterminar la secuencia de nucleótidos llamada ADN. Para realizar un análisis de ADN primeramente debemos extraerlo con cuidado de algún ser vivo tratando en lo posible de no dañarlo para que los resultados sean óptimos.
El proceso de extracción del ADN sigue ciertas pautas para su correcta purificación que es uno de los pasos básicos para obtener ADN. El primer paso en la purificación del ADNpor lo general consiste en homogenizar las células y aislar los núcleos de los cuales se extrae el ADN. El medio de extracción debe contener un detergente en el cual se agregara una solución para que los acidos nucleicos que posee se precipiten cuando se añada etanol. Para concluir con la extracción del ADN hay que resaltar que en este proceso ocurre una lisis celular lo cual significa que el ADNqueda libre por consiguiente hay que protegerlo de las enzimas porque estas podrían degradarlo.(Castro,2005)


4. EQUIPOS Y MATERIALES:
- DNA Zol Reagent,
- Nitrógeno líquido
- Mortero y pistilo
- Micropipetas y puntas
- Espátulas
- Gradillas
- Marcador de vidrio
- Etano
- Hojas de espinaca
- Centrifuga
- Cloroformo.

5.PROCEDIMIENTO:

1. Lisis de células y núcleos-Homogenización de Tejidos
- Añadir 1ml DNA zol por 25 – 50mg de tejido (el DNA zol es el responsable de la precipitación selectiva del ADN)
- Triturar el tejido vegetal previamente congelado con nitrógeno líquido, en morteros congelados, esto ayudara a romper la pared celular y a conservar la muestra de mejor manera.
- Mezclar a fondo usando unapipeta.
- Conservar por 5 – 10 minutos a temperatura ambiente mezclando por inversión o rotación mecánica.
- Añadir 300ul de cloroformo (proporción 1:1 con DNA zol) .



Centrifugación


Centrifugar a 4000rpm por 20 minutos

- Transferir sobrenadante a un nuevo tubo. El sobrenadante esta formado por téjidos insolubles como el RNA, polisacáridos, etc.




2. Precipitación- Precipitar con 0.5ml etanol 100% por 1ml de DNA zol usado.
- Mezclar por inversión con la misma frecuencia y almacenar a Tº ambiente por 1 -3 minutos.
- Capturar el DNA con una punta y colocarlo en el fondo de un tubo limpio y centrifugar durante 3 o 4 min a 4000rpm


Lavado

- Lavar el precipitado 2 veces con 1ml de etanol 95%.
- En cada lavado invertir el tubo de 3 – 6veces.
- Colocar los tubos verticalmente por 1 minuto hasta que el ADN este en el fondo y eliminar el etanol.


3. Suspensión
- Dejar secar el ADN a temperatura ambiente por 10 -15 minutos.


4. RESULTADOS Y DISCUSION
5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
6. CUESTIONARIO

➢ ¿Cuál es la función que cumple el DNA zol Reagent?

El protocolo DNAzol Reagent contiene...