Extraccion De Adn

1. Nombre del Experimento y Objetivo
Extracción casera del ADN
Objetivos
-Realizar la extracción de ADN de tejidos animales y vegetales y reflexionar sobre la simpleza de su composición con sencillas técnicas.
- Observar la estructura fibrilar del ADN.
- Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades quimico-fisico del ADN
2. Pregunta del Experimento
¿Se podríanromper las moléculas de ADN al momento de extraerlas?
3. Plantear hipótesis de acuerdo a la pregunta planteada.
Las moléculas se pueden romper si mezclamos de manera rápida el caldo molecular.
4. Materiales a Utilizar
• Fresas, Bananos, Hígado de pollo, saliva, tomate y uvas.
• 6 tubos de ensayo.
• 6 botes de compota.
• 3 agitadores.
• 10 papel filtro.
• Machucadores/ licuadora.
• Recipientespara hacer la mezcla.
• Sal de mesa.
• Jugo de piña.
• Alcohol al 100%.
• Detergente liquido para trastos.
• Agua pura.
• Agua mineral.
Nota: Todo a utilizar tiene que ir frio (0° C)
5. Procedimiento
1.- Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado:
• 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua delgrifo.
• 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.
• 5 g de bicarbonato sódico.
• 5 ml de detergente líquido o champú.
2-. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber en la cocina (saliva, uvas, hígado, fresas, banano, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.
3.- Triturar la muestra con un poco de agua. Y así se romperán muchas células y otras quedaránexpuestas a la acción del detergente.
4.- Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar después los restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Lo ideal es mezclarlo con cuidado, para que no se rompa el tejido.
5.- Retirar 5 ml del caldomolecular a un tubo de ensayo y añadir con un embudo 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Se tiene que dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol va a quedar flotando sobre la mezcla.

Notas:
• Si se quiere realizar una extracción "profesional" puedes agregar enzimas que lo puede hacer mejor, y el producto que resultaríaseria pura.
• Cuando añadas el alcohol frío debes hacerlo de forma que resbale por las paredes del tubo para que forme una capa sobre el filtrado. Para realizarlo mejor se puede utilizar un embudo.
• Si se expone por mucho tiempo la muestra vegetal a rayos ultravioletas, esto provoca daños sobre la estructura del ADN, o aplicar ciertos conservantes que puedan provocar efectos sobre la cadena delADN.
6. Grafica del experimento.




7. Resultados y explicación
El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.
Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfatode sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma manera en el protocolo de extracción de ADN, separando las grasas (lípidos) y las proteínas que constituyen las membranas que rodean la célula y el núcleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la célula
El calor suaviza los fosfolípidos (grasas) en las membranas que rodean la célulay el núcleo. También desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas (ADNasas) las cuales, si están presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeños que lo haría imposible de ver. Si las enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, éste pierde su forma y se vuelve inactivo. Las enzimas se desnaturalizan a 60° Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80° Celsius.
Los zumos...