extraccion de ADN









INSTITUTO TECNOLÓGICO DE COSTA RICA

ESCUELA DE BIOLOGÍA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA



INFORME DE TRABAJO FINAL DE GRADUACCIÓN





COMPARACIÓN DE TRES MÉTODOS DE EXTRACCIÓN Y
PURIFICACIÓN DE ADN A PARTIR DE RESTOS ÓSEOS PARA
ANÁLISIS FORENSE.



Informe presentado a la Escuela de Biología del Instituto
Tecnológico de Costa Rica como requisito parcial para optar por
el títulode Bachiller en Ingeniería en Biotecnología












Adriana Capó Jiménez













CARTAGO, 2009




COMPARACIÓN DE TRES MÉTODOS DE EXTRACCIÓN Y
PURIFICACIÓN DE ADN A PARTIR DE RESTOS ÓSEOS PARA
ANÁLISIS FORENSE

Adriana Capó Jiménez1


RESUMEN

La extracción de ADN a partir de hueso implica la utilización de metodologías complejas
debido a problemas como la degradación, lascantidades limitantes de ADN y la presencia
de sustancias inhibidoras que pueden ser co-extraídas con el ADN. En el Laboratorio de
Genética Forense del OIJ se ha dificultado la estandarización de un protocolo útil para
extracción y análisis de ADN de alta calidad y cantidad. Con el fin de encontrar un método
que proporcione las mejores condiciones de extracción, purificación yamplificación de
ADN, se realizó la comparación de tres metodologías de extracción de ADN a partir de
restos óseos, entre ellas el método de desmineralización, el método orgánico utilizado
actualmente en el laboratorio, procedente del FBI y el Kit comercial Qiagen Blood Maxi
Kit. También se efectuó la comparación de técnicas de purificación adicionales en losprotocolos de desmineralización y FBI. La desmineralización mostró ser un método
prometedor para la extracción y amplificación de ADN de restos óseos presentado los
mejores resultados de cuantificación; mientras que las columnas Centricon® YM-50
mostraron las mejores condiciones para la concentración y purificación de ADN. En el
método del FBI es másrecomendable realizar la purificación de los extractos con
dispositivos de ultrafiltracción Centricon® YM-100. Mediante este trabajo se demostró
que el método de extracción, así como el diámetro de poro de las columnas de purificación
y el fundamento de filtración son factores determinantes en el éxito del proceso.


Palabras clave: desmineralización, Qiagen Blood Maxi Kit, tejido óseo.1
INFORME DE TRABAJO FINAL DE GRADUACCIÓN, Escuela de Biología, Instituto Tecnológico de
Costa Rica, Cartago, Costa Rica. 2008.




1




ABSTRACT


The DNA extraction from bone implies the use of complex methodologies due to problems
like the degradation, the amounts DNA obstacles and the presence of inhibiting substances
that can Co-beextracted with the DNA. In the Laboratory ofForensic Genetics of the OIJ
one has become difficult to the standardization of a useful protocol for extraction and DNA
analysis of high quality and amount. With the purpose to find a method that provides the
best conditions of DNA purification, extraction and amplification, the comparison of three
methodologies of DNA extraction was realised from bony rest, among them the method ofdemineralization, the used organic method at the moment in the laboratory, coming from
the FBI and the commercial Kit Qiagen Blood Maxi Kit. Also one took place the
comparison of additional techniques of purification in the protocols of demineralization
and FBI. The demineralization showed to be a promising method for the extraction and to
DNA amplification of bony rest presented/displayedthe best results of quantification;
whereas the columns Centricon® YM-50 showed to the best conditions for the
concentration and DNA purification. In the method of the FBI he is more recommendable
to realise the purification of the extracts with devices of ultrafiltration Centricon® YM-
100. By means of this work one demonstrated that the extraction methods, as well as the...