Extraccion De Clorofila

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PRACTICA 5
“EXTRACCION DE CLOROFILIA”


INTRODUCCION:
La fotosíntesis es el conjunto de reacciones gracias a las cuales las plantas verdes a partir de la energía luminosa transforman el agua y el anhidrido carbónico en oxígeno y sustancias orgánicas ricas en energía. Las plantas pueden captar esta luz solar gracias a los pigmentos, también llamados cromófosros (Un pigmento escualquier sustancia que absorba la luz. El color del pigmento está dado por la longitud de onda no absorbida y por lo tanto reflejada). Éntrelos pigmentos más comunes se encuentra:
La clorofila, el pigmento verde común a todas las células fotosintéticas, absorbe todas las longitudes de onda del espectro visible, excepto las de la percepción global del verde, detectado por nuestros ojos.Los pigmentos accesorios que incluyen a la clorofila b (también c, d, y e en algas y protistas) y los carotenoides, como el beta caroteno y las xantófilas (carotenoide de color amarillo), absorben la energía no absorbida por la clorofila. Otros pigmentos son la ficobilinas y bacterioclorofilas. Los carotenoides y la clorofila b absorben en la longitud de onda del verde. Ambasclorofilas también absorben en la región final del espectro (anaranjado - rojo), o sea a longitudes de onda larga y menor cantidad de energía.
OBJETIVO GENERAL
Determinar que los cromóferos componentes de los vegetales presentan un espectro de absorción de luz muy específico

OBJETIVO PARTICULAR:
* Extraer los pigmentos en las hojas de espinaca
* Determinar el espectro de absorción decada uno de los pigmentos.
MATERIAL:
*
* 1 mortero con pistilo
* 1 embudo de vidrio
* 1 embudo de separación pequeño
* 1 vaso de precipitados de 100 y 50 ml
* 1 pipeta graduada de 5 ml
* 1pipeta pasteur con bulbo
* 1 soporte universal con anillo
* 1 pinza para bureta
* 1 parrilla eléctrica
* Cristalizador, hielo
* Espectrofotómetro con celdasProporcionado por el alumno:
* 10 g de espinaca fresca
* Gasas
Reactivos:
* Etanol
* Éter dietilico
* Éter de petróleo
* Hexano
* Sulfato de sodio
* metanol

METODOLOGIA:

*Extracción de clorofila

1.- lavamos con agua las hojas y separamos los peciolos y las venas grandes.
2.- Se peso 10g de hojas


3.- Maceramos las hojas yapesadas con 10ml de etanol, en el mortero, el cual se coloco en un baño de hielo para estar a una temperatura de 4ºC.
4.- Se adiciono 5 ml de etanol y 10 ml de éter de petróleo.





5.- Filtramos el mercerado a través de una gasa colocándolo en el embudo de vidrio, recibiendo el filtrado en el embudo de separación
6.- Adicionando al embudo 15ml de la solución éter –metanol-hexano y 25ml de agua destilada.
7.- Agitamos suavemente, dejando separar las 2 fases.








8.- Separamos la fase acuosa, el cual quedo en la parte superior, de la fase orgánica colocándola esta última en un vaso de precipitado de 50ml.
9.- Se adiciono unos cristales de sulfato de sodio para eliminar los restos de agua.
10.- Sobre la parrilla eléctrica con un poco de calor, seconcentró el extracto a un volumen aproximado de 1ml





*Determinación de los espectros de absorción
1.- Determinamos a cada una de las fracciones coloridas su espectro de absorción.
2.- Se prendió el espectrofotómetro y después de 10min, ajustamos el cero de absorción a 350 nm con un blanco el cual contenía solución eluyente.
3.- Ya ajustado el cero de absorción,colocamos la solución colorida y leímos su absorbancia.
4.- Repetimos la operación 3 variando la longitud de onda cada 20 nanómetros hasta 810, abarcando el espectro visible.

RESULTADOS:
0 DE ABSORCIÓN | ABSORBANCIA |
350 | .298 |
370 | .346 |
390 | .483 |
410 | .750 |
430 | .973 |
350 | .832 |
470 | .975 |
490 | .200 |
510 | .036 |
530 | .031 |
550 | .033 |
570 |...