Extraccion de DNA de vegetales
Páginas: 3 (629 palabras)
Publicado: 14 de septiembre de 2014
EXTRACCIÓN
VEGETALES
DE
DNA
DE
TEJIDOS
Preparación del tampón (común para todos los grupos).
(Se prepara con anterioridad) 240 ml agua mineral + 3 g de sal + 10 g de bicarbonato + 10ml de champú.
Enfriar a 0º C. El tampón contiene una concentración muy alta de iones que permite romper
las membranas de las células y del núcleo.
Preparación del material biológico.
Trituracióndel material biológico, mejor en frío. Se trocean las verduras, se les añade un
poco de agua y a continuación se trituran utilizando una batidora. Para triturarlo se dan tres
pulsos de 10 segundoscada uno. Si es posible hacerlo en frío. Al triturar las verduras lo que
hacemos es romper las membranas de muchas células con lo que liberamos su contenido
(orgánulos, núcleos, proteínas, ADN, ARN...)
Mezcla del “puré” con el tampón frío.
Se cogen 5 ml del triturado y se depositan en el tubo de ensayo grande. A continuación se
le añaden 10 ml del tampón frío. Se agita VIGOROSAMENTE durante2 minutos. Al
mezclar el “puré” con el tampón conseguimos que se rompan las membranas de las células
y de los núcleos sin que se estropee el ADN que queremos obtener. Además el detergente
que llevael tampón ayuda a terminar de romper las membranas de los núcleos celulares en
los que se encuentra el ADN y además elimina proteínas que se encuentran protegiendo el
ADN.
Centrifugación 5’. Elcontenido del tubo de ensayo se separa en los dos tubos de ensayo
pequeños, de manera que los dos tengan la misma masa. A continuación estos tubos se
ponen en la centrífuga durante 5 min. Con lacentrifugación se separan los materiales más
grandes, como células enteras, membranas, grandes orgánulos (se quedan en el fondo del
tubo) de los materiales más pequeños como proteínas, pequeñosorgánulos, ADN y ARN
(que quedan en el líquido sobrenadante). Recoger el sobrenadante. Tras la centrifugación se
recoge el sobrenadante (con cuidado de no coger el precipitado) de cada uno de los tubos de...
VEGETALES
DE
DNA
DE
TEJIDOS
Preparación del tampón (común para todos los grupos).
(Se prepara con anterioridad) 240 ml agua mineral + 3 g de sal + 10 g de bicarbonato + 10ml de champú.
Enfriar a 0º C. El tampón contiene una concentración muy alta de iones que permite romper
las membranas de las células y del núcleo.
Preparación del material biológico.
Trituracióndel material biológico, mejor en frío. Se trocean las verduras, se les añade un
poco de agua y a continuación se trituran utilizando una batidora. Para triturarlo se dan tres
pulsos de 10 segundoscada uno. Si es posible hacerlo en frío. Al triturar las verduras lo que
hacemos es romper las membranas de muchas células con lo que liberamos su contenido
(orgánulos, núcleos, proteínas, ADN, ARN...)
Mezcla del “puré” con el tampón frío.
Se cogen 5 ml del triturado y se depositan en el tubo de ensayo grande. A continuación se
le añaden 10 ml del tampón frío. Se agita VIGOROSAMENTE durante2 minutos. Al
mezclar el “puré” con el tampón conseguimos que se rompan las membranas de las células
y de los núcleos sin que se estropee el ADN que queremos obtener. Además el detergente
que llevael tampón ayuda a terminar de romper las membranas de los núcleos celulares en
los que se encuentra el ADN y además elimina proteínas que se encuentran protegiendo el
ADN.
Centrifugación 5’. Elcontenido del tubo de ensayo se separa en los dos tubos de ensayo
pequeños, de manera que los dos tengan la misma masa. A continuación estos tubos se
ponen en la centrífuga durante 5 min. Con lacentrifugación se separan los materiales más
grandes, como células enteras, membranas, grandes orgánulos (se quedan en el fondo del
tubo) de los materiales más pequeños como proteínas, pequeñosorgánulos, ADN y ARN
(que quedan en el líquido sobrenadante). Recoger el sobrenadante. Tras la centrifugación se
recoge el sobrenadante (con cuidado de no coger el precipitado) de cada uno de los tubos de...
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