EXTRACCION DE DNA PLASMIDICO

EXTRACCION DE DNA PLASMIDICO











MARIA FERNANDA CORREA
LORENA SERNA DUQUE
FABIAN MESA ROBERT
DAVID MORALES
SAID BLANQUICETH











Prof: Leopoldo Arrieta Violet










UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
ESCUELA DE BIOLOGIA PURA
BIOLOGÍA MOLECULAR
TUNJA
2014

EXTRACCION DE DNA PLASMIDICO

1. INTRODUCCIÓN
Los plásmidos son moléculas deDNA extra cromosómico, circular y generalmente de pequeño tamaño que se encuentran en muchas especies bacterianas y que se pueden replicar de manera independiente del DNA cromosómico. A diferencia de éste, los plásmidos no son necesarios para la viabilidad general de la célula, pero pueden contener genes que contribuyen a la supervivencia en condiciones especiales, como los que confierenresistencia a antibióticos, a metales etc. Algunas clases de plásmidos poseen además la propiedad conocida como "replicación relajada", esto es, están presentes en forma de muchas copias por célula, lo que facilita enormemente su aislamiento y purificación. (1)
La obtención de altas cantidades de ADN plasmídico puro es fundamental a la hora de analizarlo o utilizar a éste como vector enaplicaciones posteriores. El avance de la ingeniería genética y de las técnicas de ADN recombinante ha supuesto un aumento del número y variedad de técnicas de purificación de ADN. En comparación con métodos tradicionales (que utilizan fenol u otros reactivos tóxicos), los nuevos métodos utilizan reactivos no peligrosos, mientras que mantienen un alto rendimiento y pureza del producto final. (2)
Seutilizó en este laboratorio El kit Wizard de purificación de ADN genómico, se ha diseñado para el aislamiento de ADN a partir de células blancas de la sangre,en tejidos animales , también se utiliza entejidos de las plantas, levadurasy bacterias Grampositivas y Gram negativas . El kit de purificación de ADN genómico se basa en un proceso de cuatro pasos:
En el procedimiento de purificación que lisalas células y los núcleos, y el aislamiento de ADN a partir de células blancas de la sangre , este paso implica la lisis de los glóbulos rojos
Las células de la sangre en la solución de lisis celular,seguida por la lisis de las células blancas de la sangrey sus núcleos en la solución de lisis de núcleos. Una etapa de digestión RNAsa se ​​puede incluir en este momento, es opcional para algunasaplicaciones.
 Las proteínas celulares se eliminan a continuación por una etapa de precipitación de la sal, que precipita las proteínas pero deja el ADN genómico de alto peso molecular en solución.
El ADN genómico se concentra y se desala mediante precipitación con isopropanol.
El ADN purificado con este sistema es adecuado para una variedad de aplicaciones, incluyendo la amplificación, ladigestión con endonucleasas de restricción y las hibridaciones de membrana. Las soluciones importantes para este proceso son: La lisozima: también llamada muramidasa, es una enzimaque daña las células bacterianas catalizando la hidrólisis de las uniones beta 1,4 entre los residuos de ácido N-acetilmurámico y N-acetil-D-glucosamina en un peptidoglicano. La lisozima es abundante en numerosas secrecionescomo la saliva, las lágrimas y el moco. Está presente también en los gránulos citoplasmáticos de los neutrófilos polimorfonucleares PMN. Etanol: Limpia el ADN de otras biomoléculas por un proceso llamado "precipitación".  Este Proceso, hace que el ADN se deshidrate, Pierda contacto con las Moléculas de agua que lo rodean, y lo aíslade la Solución acuosa para dejarlo libre de impurezas.Isopropanol: hace que el DNA se precipite y quede en el fondo del tubo eppendorf. EDTA: se utiliza comúnmente para inactivar Enzimas dependientes de metal que podrían dañar el ADN o Las proteínas.
2. OBJETIVOS
Extraer el DNA de Bacterias Gram (+)
Entender los pasos básicos de la extracción del DNA

3. PREGUNTA DE INVESTIGACION

¿Qué reactivos permiten afirmar que se obtuvo DNA?
4. HIPÓTESIS
La...